Ziehl-Neelsen दाग फाउंडेशन, अभिकर्मकों और तकनीक

ज़िहल-नीलसेन का दाग अल्कोहल-एसिड प्रतिरोधी सूक्ष्मजीवों (एएआर) की पहचान करने के लिए एक रंग तकनीक में। इस माइक्रोबायोलॉजी प्रक्रिया का नाम इसके लेखकों को संदर्भित करता है: जीवाणुविज्ञानी फ्रांज ज़ेहल और पैथोलॉजिस्ट फ्रेडरिक नीलसन.

यह तकनीक एक प्रकार का अंतर रंगाई है, जिसका अर्थ है कि आप जिन संरचनाओं का अवलोकन करना चाहते हैं, उनमें अंतर करना और बाद में पहचानने के बीच विभिन्न रंगों का उपयोग करना। Ziehl-Neelsen दाग का उपयोग कुछ प्रकार के सूक्ष्मजीवों की पहचान करने के लिए किया जाता है.

इन सूक्ष्मजीवों में से कुछ माइकोबैक्टीरिया हैं (उदाहरण के लिए, माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस), नोकार्डियस (उदाहरण के लिए), नोकार्डिया सपा।) और कुछ एककोशिकीय परजीवी (उदाहरण के लिए), क्रिप्टोस्पोरिडियम परवुम)। ग्राम स्टेन नामक एक सामान्य तकनीक के माध्यम से कई जीवाणुओं को वर्गीकृत किया जा सकता है.

हालांकि, कुछ बैक्टीरिया समूहों को उनकी पहचान करने के लिए अन्य तरीकों की आवश्यकता होती है। Ziehl-Neelsen धुंधला जैसी तकनीकों को पहली दीवार को ठीक करने के लिए गर्मी के साथ रंजक के संयोजन की आवश्यकता होती है.

फिर एक मलिनकिरण प्रक्रिया आती है जो दो परिणामों की अनुमति देती है: एसिड और अल्कोहल द्वारा मलिनकिरण के लिए प्रतिरोध या संवेदनशीलता.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 माध्यमिक रंग
• 2 अभिकर्मक
  • 2.1 प्राथमिक रंग
  • २.२ निश्चय समाधान
  • 2.3 द्वितीयक रंग (एंटी-कलरेंट)
• 3 तकनीक
  • 3.1 एसिड-फास्ट धुंधला प्रक्रिया
• 4 संदर्भ

आधार

इस धुंधला तकनीक का आधार इन सूक्ष्मजीवों की कोशिका भित्ति गुणों पर आधारित है। दीवार एक प्रकार के फैटी एसिड से बनती है जिसे माइकोलिक एसिड कहा जाता है; ये बहुत लंबी श्रृंखलाओं की विशेषता है.

जब फैटी एसिड में बहुत लंबी संरचना होती है, तो वे रंगों को अधिक आसानी से बनाए रख सकते हैं। सेल की दीवार की उच्च माइकोलिक एसिड सामग्री के कारण बैक्टीरिया के कुछ जेनेरा को ग्राम दाग द्वारा दागना बहुत मुश्किल है.

ज़ेहल-नीलसेन दाग में, एक मूल डाई, फेनोलिक यौगिक कार्बोल फ़्यूचिन, का उपयोग किया जाता है। यह सेल की दीवार के फैटी एसिड के साथ बातचीत करने की क्षमता है, जो कमरे के तापमान पर मोमी बनावट है.

कार्बोच फुकसिन धुंधला हो जाना गर्मी की उपस्थिति में सुधार होता है, क्योंकि मोम पिघलता है और डाई अणु कोशिका की दीवार में अधिक तेजी से चलते हैं.

बाद में उपयोग किया जाने वाला एसिड उन कोशिकाओं को त्यागने का काम करता है जो दाग नहीं थे क्योंकि उनकी दीवार पर्याप्त रूप से संबंधित नहीं थी; इसलिए, एसिड डिक्राइज़र की ताकत एसिड डाई को हटाने में सक्षम है। इस मलिनकिरण का विरोध करने वाली कोशिकाओं को एसिड-प्रतिरोधी कहा जाता है.

माध्यमिक रंग

नमूने के मलिनकिरण के बाद, यह दूसरे डाई के साथ विपरीत होता है जिसे द्वितीयक डाई कहा जाता है। आमतौर पर मिथाइलीन ब्लू या मैलाकाइट ग्रीन का इस्तेमाल किया जाता है.

माध्यमिक डाई पृष्ठभूमि सामग्री को दागती है और, परिणामस्वरूप, पहले चरण में रंगाई गई संरचनाओं के विपरीत बनाता है। केवल फीका पड़ा हुआ कोशिका दूसरी डाई (एंटी-स्टेन) को अवशोषित करती है और अपना रंग लेती है, जबकि एसिड प्रतिरोधी कोशिकाएं लाल रंग को बनाए रखती हैं.

की पहचान के लिए इस प्रक्रिया का अक्सर उपयोग किया जाता है माइकोबैक्टीरियम ट्यूबरकुलोसिस और माइकोबैक्टीरियम लेप्राई, जिसे एसिड-फास्ट बेसिली कहा जाता है.

अभिकर्मकों

प्राथमिक रंग

कार्बोक्सिन 0.3% फुकसिन (फ़िल्टर किया हुआ) का उपयोग किया जाता है। यह डाई अल्कोहल के मिश्रण से तैयार की जाती है: इथेनॉल में फिनोल (90%) या मेथनॉल (95%), और इस मिश्रण में 3 ग्राम मूल फुकसिन घुल जाता है.

घोल समाधान

इस चरण में आप 3% अल्कोहल एसिड या 25% सल्फ्यूरिक एसिड के समाधान का उपयोग कर सकते हैं.

द्वितीयक रंग (एंटी-कलरेंट)

आमतौर पर नमूनों में विपरीत प्रदर्शन करने के लिए उपयोग की जाने वाली डाई आमतौर पर 0.3% मेथिलीन नीला है। हालांकि, दूसरों को भी इस्तेमाल किया जा सकता है, जैसे कि 0.5% मैलाकाइट ग्रीन.

तकनीक

एसिड-फास्ट स्टेनिंग प्रक्रिया

एक जीवाणु धब्बा तैयार करें

यह तैयारी एक साफ और सूखी स्लाइड पर की जाती है, जो बाँझपन की सावधानियों का पालन करती है.

धब्बा सूखना

स्मीयर को कमरे के तापमान पर सूखने दें.

नमूना गरम करें

नीचे की स्लाइड में आग लगाकर नमूने को गर्म किया जाना चाहिए। शराब के साथ एक निर्धारण तब किया जा सकता है जब स्मीयर को थूक से तैयार नहीं किया गया है (इसे सफेद करने के लिए सोडियम हाइपोक्लोराइट के साथ इलाज किया गया है) और अगर यह तुरंत रंगे जाने वाला नहीं है।.

एम। तपेदिक यह ब्लीच के साथ और धुंधला हो जाने की प्रक्रिया के दौरान समाप्त हो जाता है। अनुपचारित थूक की थर्मोप्रोफिंग नहीं मारेगी एम। तपेदिक, जबकि शराब के साथ निर्धारण जीवाणुनाशक है.

दाग को ढकें

दाग कार्बोच फ्यूचिन समाधान (प्राथमिक मूल दाग) के साथ कवर किया गया है.

दाग को गरम करें

यह 5 मिनट के लिए किया जाता है। आपको वाष्प रिलीज (लगभग 60 डिग्री सेल्सियस) पर ध्यान देना चाहिए। यह महत्वपूर्ण है कि नमूना को ज़्यादा गरम न करें और जलने से बचें.

दाग के ताप के संबंध में, फुकसिन कार्बोल को गर्म करते समय बहुत सावधानी बरती जानी चाहिए, खासकर अगर दाग को एक ट्रे या अन्य कंटेनर में ले जाया जाता है जिसमें पिछले दाग से अत्यधिक ज्वलनशील रसायन एकत्र किए गए होते हैं.

एसिड लाइट, मेथनॉल या 70% इथेनॉल की कुछ बूंदों के साथ पहले सिक्त एक हल्का झाड़ू का उपयोग करके स्लाइड के तहत केवल एक छोटी सी लौ को लगाया जाना चाहिए। इथेनॉल में भिगोए हुए बड़े झाड़ू के उपयोग से बचें क्योंकि यह आग का खतरा है.

दाग धो लें

यह धुलाई साफ पानी से की जानी चाहिए। यदि नल का पानी साफ नहीं है, तो फिल्टर या आसुत पानी से धब्बा धो लें, अधिमानतः.

एसिड शराब के साथ स्मीयर को कवर करें

यह एसिड अल्कोहल 3% पर होना चाहिए। कवरेज 5 मिनट के लिए किया जाता है या जब तक स्मीयर को पर्याप्त रूप से अलग नहीं किया जाता है, अर्थात् पीला गुलाबी.

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि एसिड अल्कोहल ज्वलनशील है; इसलिए, इसका उपयोग बहुत सावधानी से किया जाना चाहिए। इग्निशन के स्रोतों के पास होने से बचें.

दाग धो लें

धुलाई साफ, आसुत पानी के साथ होनी चाहिए.

स्मीयर को डाई से कवर करें

यह हरे रंग का मैलाकाइट (0.5%) या मिथाइलीन नीला (0.3%) डाई 1 या 2 मिनट के लिए हो सकता है, सबसे लंबे समय तक अगर स्मीयर पतला है.

दाग धो लें

साफ पानी को फिर से इस्तेमाल किया जाना चाहिए (आसुत).

नाली

स्लाइड के पीछे को साफ किया जाना चाहिए और दाग को एक जल निकासी शेल्फ पर रखा जाना चाहिए, ताकि यह हवा से सूखा हो (सुखाने के लिए शोषक कागज का उपयोग न करें).

माइक्रोस्कोप में धब्बा की जांच करें

100X उद्देश्य और विसर्जन तेल का उपयोग किया जाना चाहिए। स्मीयर को व्यवस्थित रूप से स्कैन करें और संबंधित टिप्पणियों को लिखें.

परिणामों की व्याख्या करें

सैद्धांतिक रूप से, सूक्ष्मजीव जो एक लाल रंग में रंगे होते हैं उन्हें एसिड-फास्ट पॉजिटिव (AAR +) माना जाता है.

इसके विपरीत, यदि सूक्ष्मजीव नीले या हरे रंग के दाग वाले होते हैं, तो काउंटर-डाई के रूप में उपयोग की जाने वाली डाई के आधार पर, उन्हें नकारात्मक शराब प्रतिरोधी एसिड (AAR-) माना जाता है.

संदर्भ

1. अपूर्बा, एस। और संध्या, बी। (2016). प्रैक्टिकल माइक्रोबायोलॉजी की अनिवार्यता (पहला संस्करण)। जेपी ब्रदर्स मेडिकल पब्लिशर्स.
2. बॉमन, आर। (2014). शरीर प्रणाली द्वारा रोगों के साथ माइक्रोबायोलॉजी (4 थ एड।). पियर्सन शिक्षा, इंक.
3. हेरिटेज, जे।, इवांस, ई। और किलिंगटन, ए। (1996). परिचयात्मक माइक्रोबायोलॉजी (पहला संस्करण)। कैम्ब्रिज यूनिवर्सिटी प्रेस.
4. मोरेलो, जे।, ग्रैनाटो, पी। विल्सन, एम। एंड मॉर्टन, वी। (2006). माइक्रोबायोलॉजी में प्रयोगशाला मैनुअल और वर्कबुक: रोगी देखभाल के लिए आवेदन (11 वां संस्करण)। मैकग्रा-हिल एजुकेशन.
5. वसंतकुमारी, आर। (2007). माइक्रोबायोलॉजी की पाठ्यपुस्तक (पहला संस्करण)। B.I. प्रकाशन पीवीटी.