राइट का दाग नींव, सामग्री, तकनीक और उपयोग

गलत का दाग 1902 में अमेरिकी रोगविज्ञानी जेम्स होमर राइट द्वारा बनाई गई एक रंग तकनीक है, रोमनोस्की के दाग से। जैसा कि रोमानोव्स्की का दाग अस्थिर था, Wrigth ने मेथनॉल को विलायक और लगानेवाला के रूप में शामिल किया.

यह रंग पॉलीक्रोमैटिक है, जिसका अर्थ है कि यह डाई को अवशोषित करने वाली संरचना के आधार पर कई रंगों को उत्पन्न करता है। यह धुंधला तकनीक व्यापक रूप से अंतर श्वेत रक्त कोशिका की गणना करने और परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा में लाल रक्त कोशिकाओं, प्लेटलेट्स और ल्यूकोसाइट्स के आकारिकी का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया गया है।.

इसका अनुप्रयोग बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि असामान्यताओं को रक्त की विभिन्न कोशिका रेखाओं में देखा जा सकता है, जिससे ल्यूकेमिया या बैक्टीरिया या परजीवी संक्रमण जैसी बीमारियों का निदान किया जा सकता है।.

शायद ये सबसे आम अनुप्रयोग हैं जिनमें इस तकनीक का उपयोग किया जाता है, हालांकि वे केवल यही नहीं हैं। यह रक्त और अस्थि मज्जा के अलावा अन्य नमूनों में भी उपयोगी है, जैसे कि नाक के स्त्राव, फेकल म्यूकस, थूक, त्वचा, आदि के नमूने।.

सूची

• राइट के दाग का 1 फाउंडेशन
• 2 सामग्री
  • २.१ तैयारी
  • 2.2 बफर बफर समाधान
  • 2.3 रंग प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक अतिरिक्त सामग्री
• राइट के दाग के 3 घटक
  • 3.1 मेथनॉल
  • 3.2 सदमे अवशोषक
  • 3.3 ईओसिन (Y)
  • 3.4 मिथाइलीन नीला
• 4 तकनीक
• 5 उपयोगिता
  • ५.१ हेमाटोलॉजी
  • 5.2 नाक स्राव
  • ५.३ परजीवी
  • 5.4 श्वसन संबंधी संक्रमण
  • 5.5 जीवाणु विज्ञान
  • 5.6 मायकोलॉजी
• 6 राइट के दाग के साथ रक्त के नमूने की संरचना कैसे देखी जाती है??
• 7 अच्छी धुंधला के लिए सिफारिशें
• गलत रंग में 8 गलतियाँ
  • 8.1 बहुत पीला धुंधला
  • 8.2 रंगकर्मी की प्राथमिकताएं
  • 8.3 अत्यंत लाल या नीले रंग के साथ धब्बा
• 9 भंडारण मोड
• 10 संदर्भ

राइट का दाग नींव

राइट का दाग रोमनवोस्की के दाग से पैदा हुआ था, जिसमें एक एसिड डाई (ईओसिन वाई) और एक मूल (मिथाइलीन ब्लू) और इसके ऑक्सीकरण उत्पादों से मिथाइल अल्कोहल का घोल होता है।.

राइट के दाग में प्रयुक्त रंगों के मिश्रण से रोमॉस्की का प्रभाव ज्ञात होता है, अर्थात् यह ल्यूकोसाइट्स के नाभिक और न्यूट्रोफिलिक कणिकाओं को एक सुंदर बैंगनी रंग प्रदान करता है, जबकि लाल रक्त कोशिकाओं को गुलाबी रंग में रंगा जाता है।.

राइट के दाग का रंग रेंज देने के लिए जिम्मेदार घटक नीले बी और ईओसिन वाई हैं। मनाया प्रभाव रासायनिक संरचनाओं के लिए रंगों के बंधन और नीले बी और ईओसिन वाई के परस्पर क्रिया पर निर्भर करेगा।.

अम्लीय संरचनाएं जैसे कि न्यूक्लिक एसिड, परमाणु प्रोटीन और कुछ सेल प्रकारों के प्रतिक्रियाशील अपरिपक्व साइटोप्लाज्म, नीले बी को ठीक करते हैं (मूल डाई).

जबकि बुनियादी संरचनाएं जैसे हीमोग्लोबिन, खंडों के ईोसिनोफिल्स के कण, अन्य सेलुलर संरचनाओं के बीच, ईोसिन वाई (एसिड डाई) को ठीक करते हैं.

धुंधला होने का परिणाम विभिन्न कारकों से प्रभावित हो सकता है, जैसे कि राइट डाई का पीएच, बफर और वॉश समाधान; साथ ही धुंधला और फिक्सिंग समय.

इसलिए, अभिकर्मकों की तैयारी में प्रत्येक कदम महत्वपूर्ण है और हर विवरण का ध्यान रखना चाहिए.

सामग्री

राइटिंग रंग। 100 एमएल के लिए यह आवश्यक है:

राइट डाई के 0.3 ग्राम वजन, 97 मिलीलीटर मेथनॉल और 3 मिलीलीटर ग्लिसरॉल को मापें.

तैयारी

मोर्टार में, राइट की डाई की भारी मात्रा डालें और धीरे-धीरे ग्लिसरॉल डालें जब तक कि पाउडर पूरी तरह से भंग न हो जाए।.

फिर मेथनॉल मिलाया जाता है, मिश्रित होता है और एक एम्बर बोतल में डाला जाता है.

समाधान का उपयोग करने से पहले कोमल आंदोलनों और फिल्टर के साथ हिलाया जाना चाहिए.

बफर बफर

डिस्टिल्ड वॉटर के एक लीटर में, 3.76 ग्राम डिसोडियम हाइड्रोफॉस्फेट (Na)₂HPO₄   2H₂0) प्लस 2.1 ग्राम पोटेशियम डाइहाइड्रोजेन फॉस्फेट (केएच)₂पीओ₄).

बहुत अच्छी तरह से मिलाएं जब तक सभी शामिल अभिकर्मकों को भंग नहीं किया जाता है। पीएच को 7.2 पर समायोजित करें। एक ग्लास जार में डालो और कमरे के तापमान पर रखें.

रंग प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक अतिरिक्त सामग्री

इसके अतिरिक्त, रंगाई तकनीक को अंजाम देने के लिए अन्य सामग्रियों की आवश्यकता होती है, ये हैं: वस्तुओं को ढकने वाली चादरें या वस्तुओं को ढंकना, रंगाई का पुल, पानी या धुलाई के लिए बफर, रंग भरने के लिए स्टॉपवॉच और कुछ सुखाने की सामग्री (शोषक कागज, धुंध या कपास).

राइट दाग घटक

मेथनॉल

अल्कोहल (मेथनॉल) स्लाइड को रक्त स्मीयर के एक जुड़नार के रूप में कार्य करता है.

मूल रूप से यह एक कम करने वाला अभिकर्मक, निर्जलीकरण और कोगुलेंट सुधारक है। इसलिए, इसका कार्य प्रोटीन को जमा देना और उन्हें अघुलनशील बनाना है, लेकिन उन्हें नकारे बिना.

मेथनॉल सभी प्रयोगशालाओं में स्मीयरों को ठीक करने के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला अभिकर्मक है, क्योंकि यह इथेनॉल के साथ प्राप्त की तुलना में बेहतर परिणाम प्रदान करता है। आदर्श एकाग्रता 99% है.

सदमे अवशोषक

बफर (बफ़र्ड सॉल्यूशन) में डाई के पीएच को समायोजित या बनाए रखने का कार्य होता है, क्योंकि 7.2 के लिए समायोजित पीएच सेल संरचनाओं को ठीक से अवशोषित करने के लिए आवश्यक है।.

दूसरी ओर, मेथनॉल निर्धारण का मार्ग कोशिकाओं को निर्जलित करता है और बफर उन्हें फिर से सक्रिय करने में मदद करता है.

Eosin (Y)

ईोसिन में बुनियादी घटकों के लिए एक आत्मीयता है क्योंकि यह एक एसिड डाई है। दो प्रकार के ईओसिन एक-दूसरे के समान होते हैं, इसलिए दोनों में से किसी एक का उपयोग किया जा सकता है, एक ही परिणाम प्राप्त करना.

एक को इओसिन वाई, पीला ईोसिन या टेट्राब्रोमोफ्लोरेसिन और दूसरे ईओसिन बी, ब्लिश एरिथ्रोसिन बी या डिब्रोमोडिनिट्रोफ्लोरोसेन कहा जाता है। हालांकि, ईोसिन वाई सबसे अधिक उपयोग किया जाता है.

इस डाई की सबसे महत्वपूर्ण संपत्ति इसकी नकारात्मक ध्रुवीयता है, यह इसे सकारात्मक चार्ज के साथ सेलुलर संरचनाओं द्वारा आकर्षित करती है.

मेथिलीन नीला

यह मूल रंग है। इसकी मुख्य संपत्ति मेटाक्रोमैसिया है, अर्थात, सभी संरचनाएं एक ही रंग में रंगे जाने वाली नहीं हैं, यह संरचनाओं की रासायनिक संरचना पर निर्भर करती है कि यह रंग है.

कुछ हल्के या गहरे नीले और अन्य गहरे बैंगनी या हल्के बकाइन को बदल देंगे.

तकनीक

1-नमूने के फैलाव को बाहर ले जाएं ताकि एक पतली फिल्म बनी रहे, या तो एक स्लाइड या आवरण पर.

2-हवा को लगभग 2 घंटे तक सूखने दें.

3-सूखे स्मीयर को धुंधला पुल या धुंधला हो जाने वाले ट्रे पर रखें जिससे नमूना ऊपर की ओर फैला हो.

4-शीट को राइट डाई ड्रॉप के साथ कवर करें जब तक कि यह पूरी सतह को कवर न कर दे। 5 - 8 मिनट के लिए छोड़ दें.

5-डाई को पूरी तरह से स्लाइड को कवर करना चाहिए, किनारों पर फैलने के बिना। यदि रंग भरने के समय के दौरान यह वाष्पित होना शुरू हो जाता है, तो अतिरिक्त बूंदों को रखा जाना चाहिए.

6-बाद में सदमे अवशोषक की एक समान मात्रा जोड़ें, जब तक कि विशिष्ट धातु चमक दिखाई न दे, तब तक थोड़ा झटका दें। 10 से 15 मिनट तक करें.

7-नल के पानी से धोएं, मुलायम जेट को तब तक रखें जब तक शीट गुलाबी न दिखे.

8-शराब के साथ लगाए गए धुंध के साथ स्लाइड के पीछे संलग्न डाई को हटा दें.

9-माइक्रोस्कोप में इसे विसर्जित करने के लिए विसर्जन तेल रखने से पहले स्मीयर को बहुत अच्छी तरह से सूखने दें.

उपयोगिता

रुधिर

यह परिधीय रक्त स्मीयरों को गलाने के लिए, मोटे रक्त स्मीयरों की जांच के लिए और अस्थि मज्जा के नमूनों से कोशिकाओं के अध्ययन के लिए आदर्श है.

रंगों के इस संयोजन के रासायनिक गुणों के कारण सेलुलर संरचनाओं को आसानी से पहचाना जा सकता है, जो विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं को अलग करने में सक्षम हैं.

नाक का स्राव

एलर्जी रिनिटिस के निदान में नाक स्राव (उपकला कोशिकाओं, खंडित ईोसिनोफिल्स, पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर) की कोशिकाओं की पहचान करने के लिए यह तकनीक बहुत उपयोगी है.

Parasitology

इस अर्थ में, यह के अध्ययन के लिए उपयोगी रहा है लीशमैनिया सपा त्वचा के अल्सर में चमड़े के नीचे सेलुलर ऊतक के हिस्टियोसाइट्स के भीतर। इसी तरह, यह मल के नमूनों में ल्यूकोसाइट्स (फेकल ल्यूकोोग्राम) की पहचान करने के लिए उपयोग किया जाता है.

इस मामले में, यह जानने के लिए डॉक्टर की रुचि है कि मल में मौजूद ल्यूकोसाइटोसिस पॉलीमोर्फोन्यूक्लियर या मोनोन्यूक्लियर है या नहीं। फेकल ल्यूकोग्राम में यह पता लगाने का मार्गदर्शन करेगा कि क्या यह एक जीवाणु या वायरल संक्रमण है.

दूसरी ओर, रक्त में फैलने वाले परजीवी एरिथ्रोसाइट के अंदर या प्लाज्मा में मुक्त पाए जा सकते हैं। वांछित परजीवी हैं प्लास्मोडियम एसपीपी, ट्रिपैनोसोमा क्रूज़ी और फाइलेरिया, और पशु चिकित्सा में यह खोज के लिए उपयोगी है एलेरिया समान और बबसिया कैबली, शिशुओं के प्रेरक कारक, विशेष रूप से विषुव में.

राइट और गिमेसा दाग हेमोपैरसाइट्स को सामान्य सेलुलर घटकों से अलग कर सकते हैं। इसके लिए आप दो प्रकार के स्प्रेड का उपयोग कर सकते हैं:

ठीक है

स्लाइड पर रक्त एक पतली फिल्म की तरह फैलता है। राइट के दाग के साथ, नाभिक और साइटोप्लाज्म की विशेषताओं का खुलासा.

मोटी बूंद

इस पद्धति का उपयोग रक्त की एक बड़ी मात्रा में परजीवियों की उपस्थिति की जांच के लिए किया जाता है.

इसके लिए, रक्त की एक बड़ी बूंद को एक स्लाइड पर रखा जाता है। एक बार, आपको एक और स्लाइड के किनारे का उपयोग करके, केंद्र से बाहर की ओर बड़े और बड़े सर्कल बनाने, डिफिब्रिनेट करना चाहिए.

अंत में, मोटी धब्बा में परजीवियों का निरीक्षण करने के लिए, एरिथ्रोसाइट्स को पानी के साथ lysed किया जाना चाहिए.

श्वसन संबंधी संक्रमण

श्वसन स्तर पर यह तकनीक उपयोगी भी है, क्योंकि थूक के नमूने, ब्रोन्कियल या ब्रांकोवैलेवलर लैवेज में मौजूद कोशिकाएं, निदान स्थापित करने के लिए महत्वपूर्ण हैं.

इसी तरह, पॉलीमॉर्फोन्यूक्लियर सेल और मोनोन्यूक्लियर सेल को यहां प्रतिष्ठित किया जा सकता है.

जीवाणुतत्व

बैक्टीरियोलॉजी में इस तकनीक का उपयोग सीमित है, क्योंकि यह बैक्टीरिया को धुंधला करने के लिए अच्छा नहीं है, यही कारण है कि उनके लिए अन्य विशेष रंग तकनीकों का उपयोग किया जाता है.

हालांकि, इसका उपयोग शामिल निकायों के साथ उपकला कोशिकाओं की तलाश के लिए किया गया है क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस यूरेथ्रल या एंडोकेरिकल म्यूकोसा के स्मीयरों में, हालांकि यह माना जाना चाहिए कि यह इसके लिए सबसे अच्छा तरीका नहीं है.

लाल रक्त कोशिकाओं के बीच सर्पिल-प्रकार के बैक्टीरिया का निरीक्षण करना भी संभव है बोरेलिया बर्गडॉर्फ़री संक्रमित रोगियों में, साथ ही साथ शरीर या शरीर को शामिल करना एर्लिचिया सपा रक्त में लिम्फोसाइटों, मोनोसाइट्स या न्यूट्रोफिल के साइटोप्लाज्म में.

कवक विज्ञान

हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलैटम एक रोगजनक कवक है, जिसे अक्सर विभिन्न ऊतक नमूनों के सूक्ष्म अवलोकन द्वारा निदान किया जाता है, जो राइट के दाग के साथ सना हुआ है.

राइट के दाग के साथ रक्त के नमूने की संरचना कैसे देखी जाती है?

अच्छे धुंधला के लिए सिफारिशें

रक्त के नमूनों का विस्तार अनायास हवा सूख जाना चाहिए। स्मीयर डाई के बेहतर निर्धारण के लिए जितना संभव हो उतना पतला होना चाहिए और ओवरकोलोरेशन से बचना चाहिए.

उच्च गुणवत्ता वाले रंगाई के लिए, स्मीयर की तैयारी के बाद दो घंटे के दौरान धुंधला हो जाना उचित है। दूसरी ओर, आदर्श नमूना केशिका रक्त है, बिना थक्कारोधी.

हालांकि, यदि शिरापरक रक्त का उपयोग किया जाता है, तो इसका उपयोग EDTA एंटीकोआगुलंट के रूप में किया जाना चाहिए और हेपरिन नहीं, क्योंकि बाद में कोशिका संरचना विकृत हो सकती है.

तैयार किए गए colorant की गिरावट को रोकने के लिए सूखे स्थानों में संग्रहीत किया जाना चाहिए.

धोने की प्रक्रिया के दौरान तटस्थ पीएच में समायोजित पानी के उपयोग की सिफारिश की जाती है.

अंत में, रंगाई विधियों का परीक्षण करना उचित है जो प्रयोगशाला में हर बार उपयोग किए जाते हैं.

यह गुणवत्ता नियंत्रण के रूप में नमूने या विस्तारित पैटर्न रंगाई द्वारा किया जाता है। यह कदम महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह सुनिश्चित करता है कि धुंधला ठीक से तैयार किया गया है और रंग बार अच्छी तरह से मानकीकृत है.

यदि पैटर्न शीट बुरी तरह से रंगीन है, तो ऐसी समस्याएं हैं जिन्हें हल किया जाना चाहिए.

Wrigth कलरिंग में सामान्य गलतियाँ

बहुत पीला धुंधला

बहुत पीला धब्बा, आमतौर पर धुंधला होने के बहुत कम समय या बहुत अतिरंजित धोने के कारण। यह डाई के साथ संपर्क समय को लंबा करके या धोने के समय को कम करके सही किया जाता है.

डाई उपजी है

स्मीयर में डाई की उपस्थिति कई कारणों से हो सकती है, हालांकि, सबसे अधिक लगातार कारण हैं: अनफ़िल्टर्ड डाई का उपयोग, असमान रंग वाले पुलों पर धुंधला हो जाना, धूल या ग्रीस के साथ गंदी चादर का उपयोग करना, एक अच्छा धोना नहीं धुंधला खत्म करो.

अत्यंत लाल या नीले रंग के साथ धब्बा

बफर रंगकर्मी के पीएच के लिए जिम्मेदार है। संकेतित (एसिड) के नीचे पीएच के साथ रंजक बहुत लाल स्मीयरों के परिणामस्वरूप होगा.

यदि डाई का पीएच ऊपर है (क्षारीय) तो एक अत्यधिक नीले धब्बा प्राप्त किया जाएगा.

भंडारण मोड

अभिकर्मक को कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जाना चाहिए.

संदर्भ

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6. रीटामेल्स ई, चिली के माजो वी। पब्लिक हेल्थ इंस्टीट्यूट सरकार। रक्त की गिनती को पढ़ने के लिए धुंधला खून आने की सिफारिशें.