मई Grünwald-Giemsa नींव, तकनीक और उपयोग द्वारा दाग

मे ग्रुनवल्ड-गिमेसा दाग o पप्पेनहेम एक अंतर रंग तकनीक है जो Giemsa और May Grünwald अभिकर्मकों को मिलाती है। यह परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा के स्मीयरों में सामान्य और असामान्य रक्त कोशिकाओं के विभेदीकरण के साथ-साथ ऊतकीय वर्गों और कोशिका संबंधी नमूनों के धुंधलापन के लिए प्रयोग किया जाता है।.

दोनों अभिकर्मक - गिम्सा और मे ग्रुनवल्ड - रोमनोवस्की-प्रकार के धुंधला हो जाना, एक तकनीक है जो एसिड और मूल रंगों के संयोजन पर आधारित है।.

Giemsa ने ग्लिसरॉल के साथ ईओसिन, मिथाइलीन ब्लू और इसके डेरिवेटिव के मिश्रण को स्थिर करके तकनीक में सुधार किया। इसके विपरीत, मई ग्रुनवल्ड मेथेनॉल का उपयोग कर एक विलायक के रूप में ईोसिन और मिथाइलीन नीले रंग का उपयोग करता है। इस रणनीतिक संयोजन ने उत्कृष्ट परिणाम दिए हैं.

यद्यपि सेल आकृति विज्ञान के अवलोकन के संदर्भ में समान रूप से गिमेसा और राइट रंगकरण के रूप में कार्य करता है, यह तकनीक परजीवी के रंग को ठीक करने से पिछले वाले को बेहतर बनाता है जो मलेरिया, चगास रोग, लीशमैनियासिस और ट्राइकोमोनिएसिस का कारण बनता है।.

इसके अतिरिक्त, यह शुक्राणु द्रव के साइटोलॉजिकल अध्ययन के लिए एक बहुत ही उपयोगी तकनीक साबित हुई है। यह न केवल शुक्राणु की रूपात्मक विशेषताओं को दिखाते हुए उजागर किया गया है, बल्कि महान दक्षता ल्यूकोसाइट्स, उपकला कोशिकाओं और शुक्राणुजनन की कोशिकाओं के साथ अंतर करने की भी अनुमति देता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 रंगों की विविधता
• 2 तकनीक
  • 2.1 सामग्री
  • 2.2 केंद्रित डाई समाधान मई ग्रुनवल्ड
  • 2.3 सांद्रित गिमेसा डाई
  • 2.4 पीएच 7.2 पर बफर समाधान की तैयारी
  • 2.5 रक्त स्मीयर या अस्थि मज्जा धुंधला प्रक्रिया
  • 2.6 शुक्राणु द्रव की विस्तारित रंग तकनीक
  • 2.7 महत्वपूर्ण विनिर्देश
• ३ उपयोग
  • 3.1 योनि कोशिका विज्ञान
  • 3.2 शुक्राणु का नमूना
• 4 संदर्भ

आधार

तकनीक रोमानोव्स्की के धब्बे की नींव का अनुसरण करती है, जिसमें अम्लीय रंगों में कोशिकीय बुनियादी घटकों के लिए चयनात्मक आत्मीयता होती है और अम्लीय घटक मूल रंगों को आकर्षित करते हैं.

दूसरे तरीके से समझाया गया है, सेल संरचनाओं और रंजक दोनों में सकारात्मक या नकारात्मक विद्युत आवेश होते हैं; समान शुल्क प्रतिपूर्ति और विभिन्न शुल्क आकर्षित होते हैं.

उदाहरण के लिए, मेथिलीन नीला जैसे बुनियादी रंगों को सकारात्मक रूप से चार्ज किया जाता है और नकारात्मक चार्ज संरचनाओं द्वारा आकर्षित किया जाता है। यही कारण है कि इस डाई में नाभिक के धब्बे होते हैं जो डीएनए और आरएनए से समृद्ध होते हैं, जिनमें फॉस्फेट समूहों का नकारात्मक चार्ज होता है.

आरएनए युक्त मोनोन्यूक्लियर व्हाइट ब्लड सेल्स के खंडित बेसोफिल्स और साइटोप्लाज्म के कणिकाएं भी स्टाफ़ हैं.

इसी तरह, एसिड डाई एक नकारात्मक चार्ज करता है, यही वजह है कि यह एरिथ्रोसाइट्स और खंडों वाले ईोसिनोफिल्स के कणिकाओं जैसे सकारात्मक रूप से चार्ज संरचनाओं में शामिल होता है। खंडित न्यूट्रोफिल के कणिकाओं के लिए, ये दोनों रंगों को ठीक करते हैं.

रंगों की विविधता

इस तकनीक में, ऑर्थोक्रोमैटिक रंगों और मेटाक्रोमैटिक्स सह-अस्तित्व के बीच प्रतिक्रियाओं का एक संयोजन है। ऑर्थोक्रोमैटिक्स (ईओसिन और मेथिलीन ब्लू) कोशिका संरचना से जुड़ते हैं जिससे वे संबंधित होते हैं और एक स्थिर रंग प्रदान करते हैं जो अलग-अलग नहीं होते हैं.

दूसरी ओर, मेटाक्रोमैटिक्स (मेथिलीन ब्लू एज़्योर ए और एज़ूर बी का व्युत्पन्न), विशिष्ट संरचना से बंधे होने के बाद उनके मूल रंग में भिन्नता है, और यहां तक ​​कि विभिन्न प्रकार के शेड भी हो सकते हैं।.

अंत में, मई ग्रुनवल्ड समाधान द्वारा उठाए गए कदम में पानी की उपस्थिति की आवश्यकता होती है, क्योंकि इसके बिना डाई संरचनाओं में प्रवेश करेगी, लेकिन तय नहीं होगी। ऐसा होने के लिए डाई को ध्रुवीय या आयनीकृत होना चाहिए, और इस प्रकार संबंधित संरचनाओं को बनाने और संलग्न करने में सक्षम होना चाहिए.

तकनीक

सामग्री

- स्लाइड्स के लिए स्लाइड.

- रंग पुल.

- मई-गर्नवल्ड का समाधान.

- गिआमेसा दाग.

- आसुत जल.

केंद्रित डाई समाधान मई ग्रुनवल्ड

हमें ईोसिन-मेथिलीन नीला (मई ग्रुनवल्ड के अनुसार डाई) का 0.25 ग्राम वजन और 100 मिलीलीटर मेथनॉल में भंग करना चाहिए। फिर मिश्रण को 1 घंटे के लिए मिलाया जाता है और 24 घंटे आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है। समय समाप्त हो गया, यह फ़िल्टर करता है.

तकनीक को लागू करने के लिए, मई ग्रुनवल्ड डाई को निम्नानुसार पतला किया जाना चाहिए: 200 मिलीलीटर पतला डाई के लिए, केंद्रित समाधान के 30 मिलीलीटर को मापा जाता है, बफर समाधान के 20 मिलीलीटर और pH7.2-7.3 के लिए समायोजित आसुत जल के 150 मिलीलीटर जोड़ा जाता है। । फिर इसे मिश्रित और फ़िल्टर किया जाता है.

केंद्रित गिमेसा डाई

एजूर-एओसिन-मिथाइलीन नीला (गिम्स के अनुसार डाई) का 0.5 ग्राम वजन, मेथनॉल के 50 मिलीलीटर में घोलकर मिश्रण में 50 मिलीलीटर ग्लिसरीन डालें।.

तकनीक को निष्पादित करने के लिए, बफर समाधान के साथ 1:10 पतला करें और इसे 10 मिनट के लिए आराम दें। यदि आवश्यक हो तो इसे फ़िल्टर किया जा सकता है.

पीएच 7.2 पर बफर समाधान की तैयारी

उन्हें तौला जाना चाहिए:

- 40 मिलीग्राम पोटेशियम डी-हाइड्रोजन फॉस्फेट (KH2PO4).

- 151 मिलीग्राम डी-सोडियम हाइड्रोजन फॉस्फेट 12-हाइड्रेट (Na2HPO4).

दोनों यौगिकों को 100 मिलीलीटर पानी में भंग कर दिया जाता है.

रक्त स्मीयर या अस्थि मज्जा धुंधला प्रक्रिया

दो तौर-तरीके हैं: एक क्लासिक और एक तेज़.

शास्त्रीय विधा

1. पतला मई-ग्रैनवल्ड समाधान के साथ 2 या 3 मिनट के लिए स्मीयर को कवर करें.
2. पिछले समाधान को खत्म करने के लिए बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं.
3. एक ही बफर धोने के समाधान के साथ कवर करें और 1 मिनट के लिए छोड़ दें। यह विचार है कि पिछली डाई संरचनाओं के लिए तय है और एक ही समय में, कोशिकाओं को हाइड्रेटेड किया जाता है.
4. बफ़र्ड पानी पर पतला गिमेसा टिंचर की 12 बूंदें मिलाएं और मिश्रण और होमोजिनाइज़ को उड़ा दें। 15 या 20 मिनट तक खड़े रहने दें.
5. बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से स्मीयर को धोएं और इसे हवा में सूखने के लिए रखें.
6. फोकस और एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप में निरीक्षण करें जो रक्त कोशिकाओं को 40X उद्देश्य का उपयोग करके दाग देता है। यदि आवश्यक हो, तो 100X का उपयोग किया जा सकता है.

त्वरित मोड

1. 1 मिनट के लिए पतला Grünwald डाई के साथ स्मीयर को कवर करें.
2. बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं.
3. बफ़र्ड पानी के साथ कवर करें और 1 मिनट के लिए खड़े रहने दें.
4. पतला गिमेसा डाई रखें और 5 मिनट के लिए छोड़ दें.
5. बफ़र्ड डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं और हवा को सूखने दें.

यहाँ वर्णित तकनीकों एक मार्गदर्शक मार्गदर्शिका हैं, लेकिन यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि अभिकर्मकों की आपूर्ति करने वाले वाणिज्यिक घर के अनुसार प्रक्रियाएं और रंग बार भिन्न होते हैं। प्रत्येक वाणिज्यिक घर द्वारा सख्ती से इंगित किए गए चरणों का पालन करना उचित है.

शुक्राणु तरल पदार्थ रंग तकनीक का विस्तार किया

1- मई ग्रुनवालड घोल की एक पतली परत के साथ 4 मिनट के लिए फैल को कवर करें.

2- डाई निकालें और डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं.

3- आसुत जल में 15 मिनट के लिए पतला गिमेसा (1:10) की एक परत रखें.

4- डाई निकालें और डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं.

5- खुर्दबीन के नीचे सूखने और निरीक्षण करने दें.

महत्वपूर्ण विनिर्देशों

तकनीक के लिए आवश्यक है कि अभिकर्मकों और धुलाई समाधानों का पीएच 7.2-7.3 पर समायोजित हो, ताकि कोशिका संरचनाओं के लिए रंगों की समानताएं विकृत न हों और अंतिम रंग की अपेक्षा भिन्न न हों.

अनुप्रयोगों

इस तकनीक का उपयोग नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं द्वारा परिधीय रक्त और अस्थि मज्जा, ऊतक वर्गों और कोशिका विज्ञान के धब्बों को दागने के लिए किया जाता है.

हीमेटोलॉजिकल क्षेत्र में, आकार, आकार और संख्या के संदर्भ में कोशिकाओं की असामान्यताओं के अध्ययन में इस तकनीक का महत्वपूर्ण महत्व है। यह कुछ बीमारियों, जैसे ल्यूकेमिया और एनीमिया के निदान के लिए एक बहुत ही मूल्यवान उपकरण है.

इसके अलावा, यह हेमेटोलॉजिकल क्षेत्रों में परजीवियों की तलाश में एक उत्कृष्ट उपयोगिता प्रस्तुत करता है (प्लास्मोडियम सपा और ट्रिपैनोसोमा क्रूज़ी) या हिस्टोलॉजिकल (लीशमैनियास सपा).

योनि कोशिका विज्ञान

योनि कोशिका विज्ञान के लिए, यह तकनीक विशेष रूप से अवलोकन के लिए फायदेमंद है त्रिकोमोनस योनि. यह एक महत्वपूर्ण खोज है, क्योंकि इसकी उपस्थिति कार्सिनोमा चित्रों का अनुकरण करती है सीटू में जब परजीवी समाप्त हो जाता है तो गायब हो जाता है.

शुक्राणु का नमूना

यह शुक्राणु के नमूनों के अध्ययन के लिए एक आदर्श उपकरण है, क्योंकि यह शुक्राणु की गुणवत्ता के बारे में बहुमूल्य जानकारी प्रदान करता है.

डेटा जो इसे प्रदान करता है, मुख्य रूप से संख्या और आकृति विज्ञान के साथ-साथ सहवर्ती कोशिकाओं के साथ होता है जो मौजूद हो सकते हैं और जो कि महत्वपूर्ण हैं, जैसे रोगाणु कोशिकाएं, ल्यूकोसाइट्स और उपकला कोशिकाएं।.

इस विश्लेषण से शुक्राणु में सिर, गर्दन, बीच के टुकड़े और मुख्य टुकड़े में देखी गई असामान्यताओं का वर्णन करना संभव है.

इसके अलावा, वे हेमोस्पर्मिया (वीर्य में लाल रक्त कोशिकाओं की उपस्थिति) और ल्यूकोस्पर्मिया या पियोस्पर्मिया (वीर्य में ल्यूकोसाइट्स की संख्या में वृद्धि) के मामलों को दिखाने में भी मदद कर सकते हैं।.

संदर्भ

1. कोस्टामग्न एस, प्राडो एम। नए परीक्षण की मान्यता, मे ग्रुनवल्ड-गिम्स और ग्राम रंग और संस्कृति मीडिया निदान के लिए त्रिकोमोनस योनि. Parasitol। 2001; 25 (1-2): 60-64। में उपलब्ध: scielo.
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3. "मई-गर्नवल्ड-गिम्सा दाग।" विकिपीडिया, मुक्त विश्वकोश. 15 नवंबर 2018, 14:37 यूटीसी। 8 जनवरी 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. प्रयोगशाला ग्लास रसायन Panreac। हिस्टोलॉजिकल तकनीकों, हेमेटोलॉजी और माइक्रोबायोलॉजी के लिए अभिकर्मकों। पर उपलब्ध: glasschemicals.com
5. रेटामेल्स ई, मन्ज़ो वी। खून की मात्रा को पढ़ने के लिए धुंधला हो जाने की सिफारिश। राष्ट्रीय और संदर्भ बायोमेडिकल प्रयोगशाला। चिली के सार्वजनिक स्वास्थ्य संस्थान.
6. डब्ल्यूएचओ के मापदंड के अनुसार सरबिया एल स्पर्मोग्राम। विकास के एनाटॉमी और जीवविज्ञान का कार्यक्रम। चिकित्सा के संकाय चिली विश्वविद्यालय पर उपलब्ध: pp.centramerica.com