Giemsa धुंधला नींव, सामग्री, तकनीक और उपयोग

गिआमेसा दाग एसिड और मूल रंगों के मिश्रण के आधार पर, नैदानिक ​​नमूनों का धुंधला होना है। इसका निर्माण रोमनोवस्की द्वारा किए गए कार्य से प्रेरित था, जहां जर्मनी से मूल रूप से गुस्ताव गेमेसा, रसायनज्ञ और जीवाणुविज्ञानी ने यौगिकों को स्थिर करने के लिए ग्लिसरॉल जोड़कर इसे पूरा किया था।.

रोमनोव्स्की की मूल तकनीक में हुए बदलावों से सूक्ष्म अवलोकनों में सुधार करने की अनुमति मिली, इसलिए इस तकनीक को जिप्मा के नाम के साथ बपतिस्मा दिया गया.

क्योंकि यह प्रदर्शन करने के लिए एक सरल तकनीक है, अत्यधिक कार्यात्मक और किफायती है, वर्तमान में यह व्यापक रूप से नैदानिक ​​प्रयोगशाला में हेमेटोलॉजिकल स्मीयर, अस्थि मज्जा के नमूने और ऊतक वर्गों के लिए उपयोग किया जाता है।.

कोशिका विज्ञान के अध्ययन के लिए Giemsa धुंधला तकनीक बहुत उपयोगी है, क्योंकि यह कोशिकाओं की विशिष्ट संरचनाओं के अवलोकन की अनुमति देता है। यह तकनीक कोशिकाओं के साइटोप्लाज्म, नाभिक, न्यूक्लियोली, रिक्तिका और कणिकाओं को दाग देती है, जो क्रोमेटिन के ठीक निशान को भी भेदने में सक्षम है।.

इसके अलावा, नाभिक के आकार, आकार या रंग में महत्वपूर्ण परिवर्तन का पता लगाया जा सकता है, जहां नाभिक-साइटोप्लाज्म संबंध के नुकसान की कल्पना करना संभव है.

दूसरी ओर, यह अस्थि मज्जा और परिधीय रक्त में अपरिपक्व कोशिकाओं की पहचान करने की अनुमति देता है, जो ल्यूकेमिया जैसी गंभीर बीमारियों के निदान के लिए महत्वपूर्ण है। हेमोपारासाइट्स, अतिरिक्त और इंट्रासेल्युलर बैक्टीरिया, कवक, अन्य लोगों का पता लगाना भी संभव है.

साइटोजेनेटिक्स में इसका काफी उपयोग किया जाता है, क्योंकि कोशिकाओं के माइटोसिस का अध्ययन करना संभव है.

सूची

• 1 गिम्स रंग का फाउंडेशन
• 2 सामग्री
  • मां समाधान की तैयारी के लिए 2.1 सामग्री
  • 2.2 मां समाधान की तैयारी मोड
  • 2.3 बफर समाधान तैयार करने के लिए सामग्री
  • 2.4 डाई की अंतिम तैयारी
  • 2.5 अतिरिक्त सामग्री की आवश्यकता रंग प्रदर्शन करने के लिए
• 3 तकनीक
  • 3.1 धुंधला प्रक्रिया
• 4 उपयोगिताएँ
  • ४.१ हेमाटोलॉजी
  • ४.२ मायकोलॉजी
  • 4.3 जीवाणु विज्ञान
  • ४.४ पारासिटोलॉजी
  • 4.5 साइटोलॉजी
  • 4.6 साइटोजेनेटिक्स
• 5 गिमेसा धुंधला की प्रभावशीलता को प्रदर्शित करने वाला शोध
• 6 अच्छी धुंधला के लिए सिफारिशें
• गिमेसा के रंग में 7 आम गलतियाँ
  • 7.1 अत्यधिक नीला रंग
  • 7.2 अत्यधिक गुलाबी रंग
  • 7.3 स्मीयर में अवक्षेप की उपस्थिति
  • 7.4 रूपात्मक कलाकृतियों की उपस्थिति
• 8 भंडारण मोड
• 9 संदर्भ

गिमेसा रंग का फाउंडेशन

रोमनोवस्की प्रकार के रंग क्रमशः मूल और एसिड संरचनाओं के धुंधलापन को प्राप्त करने के लिए, एसिड और मूल रंगों के बीच एक विपरीत के उपयोग पर आधारित हैं। जैसा कि देखा जा सकता है कि मूल संरचनाओं को रंगने के लिए और इसके विपरीत एसिड रंजक की एक आत्मीयता है.

उपयोग की जाने वाली मूल डाई मेथिलीन ब्लू और इसके ऑक्सीडाइज्ड डेरिवेटिव (एज़्योर ए और एज़्योर बी) है, जबकि एसिड डाई ईओसिन है.

कोशिकाओं की एसिड संरचना में न्यूक्लिक एसिड होते हैं, खंडों वाले बेसोफिल्स के कण, दूसरों के बीच में, इसलिए उन्हें मेथिलीन नीले रंग से रंगा जाएगा.

इसी अर्थ में, कोशिकाओं की मूल संरचना हीमोग्लोबिन और कुछ कणिकाएं हैं जैसे कि खंडित ईोसिनोफिल्स में निहित हैं, दूसरों के बीच में; इन्हें ईओसिन से रंगा जाएगा.

दूसरी ओर, इस तथ्य के कारण कि मेथिलीन ब्लू और एज़ोर को मेटैक्रोमैटिक रंगों की विशेषता है, वे पॉलीअन के भार के अनुसार विभिन्न संरचनाओं को एक चर स्वर प्रदान कर सकते हैं।.

यह है कि बुनियादी और अम्ल रंजक का रणनीतिक संयोजन रंगों की एक विस्तृत स्पेक्ट्रम को विकसित करने में सक्षम है, प्रत्येक संरचना की जैव रासायनिक विशेषताओं के अनुसार, अम्लीय संरचनाओं के मामले में हल्के नीले, गहरे नीले, बकाइन और बैंगनी टन के माध्यम से चलना.

जबकि ईओसिन द्वारा प्रदान किया जाने वाला रंग अधिक स्थिर है, लाल-नारंगी और सामन के बीच रंग पैदा करता है.

सामग्री

मां के समाधान की तैयारी के लिए सामग्री

स्टॉक समाधान की तैयारी के लिए 600 मिलीग्राम चूर्ण गिमेसा डाई का वजन होता है, जिसकी माप 500 एसीटोन मुक्त मिथाइल अल्कोहल और 50 सीसी तटस्थ ग्लिसरीन से होती है।.

माँ समाधान की तैयारी मोड

एक मोर्टार में भारी गिमेसा पाउडर रखें। यदि गांठ हैं, तो उन्हें स्प्रे किया जाना चाहिए। बाद में मापा ग्लिसरीन की एक प्रशंसनीय राशि जोड़ें और बहुत अच्छी तरह से मिलाएं। प्राप्त मिश्रण को एक बहुत साफ एम्बर बोतल में डाला जाता है.

बाकी ग्लिसरीन को मोर्टार में रखा जाता है। बचे हुए डाई को साफ करने के लिए फिर से मिलाएं जो मोर्टार की दीवारों पर चिपक गया है और उसी बोतल में डालना है.

बोतल को ढंक कर 55 .C पर पानी के स्नान में 2 घंटे तक रखा जाता है। बैन-मैरी स्नान में, हल्के से हर आधे घंटे में मिश्रण को हिलाएं.

इसके बाद, शराब को रखने के लिए मिश्रण को ठंडा करने की अनुमति दी जाती है। पहले, मापा अल्कोहल का एक भाग मोर्टार में रखा जाता है ताकि धुलाई के बचे हुए धुलाई को समाप्त किया जा सके और फिर इसे अल्कोहल के साथ मिलाकर मिश्रण में डाल दिया जाए.

इस तैयारी को कम से कम 2 सप्ताह तक परिपक्व होने दिया जाना चाहिए। मां के समाधान के लिए उपयोग किए जाने वाले भाग को फ़िल्टर किया जाना चाहिए.

तैयारी के संदूषण से बचने के लिए, उस हिस्से को पास करने की सिफारिश की जाती है जो ड्रॉपर के साथ एक छोटी एम्बर बोतल के निरंतर उपयोग में होगी। जब भी अभिकर्मक चलता है हर बार रिचार्ज करें.

बफर समाधान तैयार करने के लिए सामग्री

दूसरी ओर, पीएच 7.2 पर एक बफर समाधान निम्नानुसार तैयार किया जाता है:

6.77 ग्राम सोडियम फॉस्फेट (निर्जल) का वजन (NaHPO) होता है₄), 2.59 ग्राम पोटेशियम डाइहाइड्रोजेन फॉस्फेट (केएच)₂पीओ₄) और 1000 cc तक आसुत जल.

डाई की अंतिम तैयारी

अंतिम धुंधला समाधान की तैयारी के लिए, फ़िल्टर किए गए स्टॉक समाधान के 2 सीसी को मापा जाता है और बफर समाधान के 6 सीसी के साथ मिलाया जाता है। मिश्रण को हिलाया जाता है.

एक प्रासंगिक तथ्य जिसे ध्यान में रखा जाना चाहिए, वह यह है कि डाई की तैयारी की तकनीक वाणिज्यिक घर के अनुसार बदल सकती है.

रंग प्रदर्शन करने के लिए आवश्यक अतिरिक्त सामग्री

वर्णित सामग्रियों के अलावा, इसे रंग पुलों, पानी की स्क्रीन या धोने के लिए बफर, वस्तुओं या आवरणों के लिए चादरें, रंग समय को नियंत्रित करने के लिए एक स्टॉपवॉच और ब्लॉटिंग पेपर या कुछ ऐसी सामग्री प्रदान की जानी चाहिए जिसे सूखने के लिए इस्तेमाल किया जा सके ( धुंध या कपास).

तकनीक

धुंधला होने की प्रक्रिया

1) रंग भरने से पहले, आपके पास नमूना एक साफ स्लाइड पर फैल जाना चाहिए।.

नमूने रक्त, अस्थि मज्जा, हिस्टोलॉजिकल ऊतकों की कटौती या गर्भाशय-योनि के नमूने हो सकते हैं। यह अनुशंसा की जाती है कि बाहरी पतले हों और उन्हें रंगने से पहले 1 या 2 घंटे सूखें.

2) आपके द्वारा रंग की जाने वाली सभी चादरें एक रंगीन पुल पर रखी गई हैं। हमेशा एक ही क्रम में काम करें और प्रत्येक शीट को अच्छी तरह से पहचानें.

3) स्मीयर पर 100% मिथाइल अल्कोहल (मेथनॉल) की कुछ बूँदें रखें और नमूने को ठीक करने और निर्जलित करने के लिए 3 से 5 मिनट के लिए छोड़ दें।.

4) शीट में मौजूद मेथनॉल को त्यागें और हवा को सूखने दें.

5) एक बार सूख जाने पर, ड्रॉपर के साथ अंतिम धुंधला समाधान रखें जब तक कि पूरी शीट को कवर न किया जाए। 15 मिनट के लिए छोड़ दें। कुछ लेखक 25 मिनट तक सलाह देते हैं। वाणिज्यिक घर पर निर्भर करता है.

6) डाई नाली और आसुत जल के साथ या 7.2 बफर समाधान के साथ धब्बा धो लें.

7) एक सोख्ता कागज पर चादरें खुली हवा में सूखने दें, एक समर्थन की मदद से लंबवत व्यवस्थित.

8) स्लाइड के पीछे एक धुंध या कपास झाड़ू के साथ पोंछ शराब के साथ सिक्त किसी भी शेष डाई को हटाने के लिए.

उपयोगिताएँ

Giemsa धुंधला तकनीक का उपयोग कई क्षेत्रों में किया जाता है, जिनमें शामिल हैं: हेमटोलॉजी, मायकोलॉजी, बैक्टीरियोलॉजी, पैरासाइटोलॉजी, साइटोलॉजी और साइटोजेनेटिक्स.

रुधिर

यह सबसे लगातार उपयोगिता है जो इस धुंधला को दिया जाता है। इसके साथ, हम अस्थि मज्जा या परिधीय रक्त के नमूनों में मौजूद कोशिकाओं में से प्रत्येक की पहचान कर सकते हैं। प्रत्येक श्रृंखला की संख्या का आकलन करने के साथ-साथ ल्यूकोसाइटोसिस या ल्यूकोपेनिया, थ्रोम्बोसाइटोपेनिया, आदि का पता लगाने में सक्षम है।.

क्योंकि यह अपरिपक्व कोशिकाओं की पहचान करने के लिए संवेदनशील है, यह तीव्र या पुरानी ल्यूकेमिया के निदान में प्रासंगिक है। एनीमिया का निदान करना भी संभव है, जैसे कि सिकल सेल रोग, सिकल सेल रोग, आदि।.

कवक विज्ञान

इस क्षेत्र में खोज करने के लिए इसका उपयोग करना आम है हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलैटम (intracellular dimorphic fungus) ऊतक के नमूनों में.

जीवाणुतत्व

हेमटोलॉजिकल स्मीयर में गिमेसा के साथ दाग का पता लगाना संभव है बोरेलियास सपा जिन रोगियों में बुखार आवर्तक नामक बीमारी होती है। फैब्रिक शिखर पर लिए गए नमूनों में एरिथ्रोसाइट्स के बीच स्पाइरोकेट्स प्रचुर मात्रा में हैं.

यह भी संभव है कि इंट्रासेल्युलर बैक्टीरिया की कल्पना की जाए रिकेट्सियास सपा और क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस संक्रमित कोशिकाओं में.

Parasitology

पैरासाइटोलॉजी के क्षेत्र में, गिम्सा धुंधला ने परजीवी रोगों जैसे मलेरिया, चगास रोग और लीशमैनियासिस के निदान की अनुमति दी है।.

पहले दो परजीवियों में प्लास्मोडियम सपा और ट्रिपैनोसोमा क्रूज़ी क्रमशः उन्हें संक्रमित रोगियों के परिधीय रक्त में कल्पना की जा सकती है, उन्हें उस चरण के अनुसार विभिन्न चरणों में पाया जा सकता है जिसमें रोग है.

रक्त परजीवियों की खोज में सुधार करने के लिए, मई-ग्रेंवल्ड डाई के साथ मिश्रित गिमेसा के दाग का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है.

इसी तरह, त्वचीय लीशमैनियासिस का निदान तब किया जा सकता है जब गिमेसा, जहां परजीवी पाया जाता है, के साथ त्वचा की बायोप्सी के नमूनों का मूल्यांकन किया जाता है.

कोशिका विज्ञान

Giemsa धुंधला का उपयोग एंडोकोर्विकल नमूनों के साइटोलॉजिकल अध्ययन के लिए भी किया जाता है, हालांकि यह इस उद्देश्य के लिए सबसे अधिक बार उपयोग की जाने वाली तकनीक नहीं है.

लेकिन संसाधनों की कमी के मामलों में, Papanicolaou तकनीक और कम लागत पर की पेशकश की तरह एक कार्यक्षमता होने का इस्तेमाल किया जा सकता है। हालाँकि, इसके लिए परीक्षक की ओर से विशेषज्ञता की आवश्यकता होती है.

सितोगेनिक क s

Giemsa धुंधला की एक प्रासंगिक विशेषता डीएनए एडेनिन और थाइमिन से समृद्ध क्षेत्रों में दृढ़ता से बाँधने की अपनी क्षमता है। यह डीएनए को संक्षेपण के विभिन्न राज्यों में, कोशिकाओं के शमन के दौरान कल्पना करने की अनुमति देता है.

क्रोमोसोम के विभिन्न क्षेत्रों के दोहराव, विलोपन या ट्रांसकोलेशन जैसे वर्णनात्मक विपथन का पता लगाने के लिए ये अध्ययन आवश्यक हैं।.

Giemsa धुंधला की प्रभावकारिता का अनुसंधान

कन्नोवा एट अल (2016), त्वचीय लीशमैनियासिस के निदान के लिए 3 रंग तकनीकों की तुलना में.

इसके लिए, उन्होंने प्रायोगिक पशु से प्राप्त नमूनों का उपयोग किया (मेसोक्रिसेटस ऑराटस) लीशमैनियास के साथ प्रयोगात्मक रूप से टीका लगाया गया.

लेखकों ने प्रदर्शित किया कि गिमेसा धुंधला पाप-मार्ट® और गफ़नी धुंधला से बेहतर था। इसलिए, उन्होंने माना कि त्वचीय लीशमैनियासिस का निदान करने के लिए Giemsa दाग आदर्श है.

लेखकों द्वारा प्राप्त किए गए उत्कृष्ट परिणाम इस तथ्य के कारण हैं कि Giemsa मिश्रण बनाने वाले रंजक का संयोजन एक अनुकूल विपरीत बनाने के लिए आवश्यक शर्तों को प्रस्तुत करता है, जिससे स्पष्ट रूप से amastigote संरचनाओं, दोनों इंट्रा और बाह्य रूप से अलग-अलग पहचानने की अनुमति मिलती है।.

अन्य तकनीकों (पैप-मार्ट® और गैफ़नी) ने भी ऐसा किया, लेकिन एक कमजोर तरीके से और इसलिए कल्पना करना अधिक कठिन है। यही कारण है कि लीफमैनियासिस के परजीवी निदान के लिए गिमेसा दाग की सिफारिश की जाती है.

इसी तरह, रामिरेज़ वगैरह (1994) के एक अध्ययन में, पहचान के लिए कंजक्टिवल स्मियर्स में गिमेसा और लेंड्रम के दाग की वैधता का मूल्यांकन किया गया क्लैमाइडिया ट्रैकोमैटिस.

लेखकों ने निर्धारित किया कि Giemsa और Ledrum धुंधला में एक ही विशिष्टता है, लेकिन Giemsa अधिक संवेदनशील था.

यह बताता है कि क्यों वर्तमान में Giemsa धुंधला क्लैमाइडियल संक्रमण के निदान के लिए सबसे अधिक बार उपयोग किया जाता है, खासकर अगर कुछ संसाधन हैं.

अच्छे धुंधला के लिए सिफारिशें

चादरों के सुखाने को तेज नहीं किया जाना चाहिए। खुली हवा में सुखाने के लिए विवेकपूर्ण समय का इंतजार किया जाना चाहिए। लगभग 2 घंटे.

सर्वोत्तम परिणामों के लिए 2 घंटे बाद तुरंत रंग.

स्मीयर को ठीक करने और बेहतर दाग के लिए नमूना को शीट पर इस तरह वितरित किया जाना चाहिए कि एक पतली और समान परत बनी रहे.

पसंदीदा रक्त का नमूना केशिका है, क्योंकि धब्बा सीधे रक्त की बूंद से बनता है और इसलिए नमूने में कोई जोड़ नहीं है, जो कोशिका संरचनाओं के रखरखाव का पक्षधर है.

हालांकि, अगर शिरापरक रक्त का उपयोग किया जाता है, तो ईटीटीए को एक थक्कारोधी के रूप में इस्तेमाल किया जाना चाहिए और हेपरिन नहीं, क्योंकि उत्तरार्द्ध आमतौर पर कोशिकाओं को विकृत करता है.

Giemsa के रंग में आम गलतियाँ

इस रंग के अभ्यास में, गलतियाँ की जा सकती हैं। संरचनाओं के रंगों में अचानक परिवर्तन से उनका सबूत है.

बेहद नीला रंग

इसके कारण हो सकते हैं:

• बहुत मोटा स्मीयर
• धुंधला समय से अधिक
• बहुत कम धुलाई.
• तटस्थ पीएच (क्षारीय) से ऊपर अभिकर्मकों का उपयोग.

इन स्थितियों के तहत निम्नलिखित संरचनाओं के रंग विकृत हो जाते हैं, जिससे कि मरने वाले गुलाबी-सामन के बजाय एरिथ्रोसाइट्स हरे रंग के दिखाई देंगे, ईोसिनोफिल्स के दाने जो लाल ईंट रंगे होने चाहिए, नीले या भूरे रंग के हो जाएंगे और इतने पर होंगे सामान्य तन्त्रिकाओं में विचलन.

अत्यधिक गुलाबी रंग

इसकी वजह यह हो सकती है:

• अपर्याप्त धुंधला समय.
• लंबे समय तक या अत्यधिक धोना.
• खराब सुखाने.
• बहुत अम्ल अभिकर्मकों का उपयोग.

इस विशेष मामले में, जो संरचनाएँ आमतौर पर नीले रंग की होती हैं, वे लगभग दिखाई नहीं देतीं, जबकि जो संरचनाएँ गुलाबी रंग की होती हैं, उनमें अतिरंजित टनकियाँ होती हैं.

उदाहरण: एरिथ्रोसाइट चमकीले लाल या मजबूत नारंगी रंग का होगा, परमाणु क्रोमैटिन पीला गुलाबी दिखेगा और इओसिनोफिल के दाने चमकीले लाल हो जाएंगे।.

स्मीयर में अवक्षेप की उपस्थिति

कारण हो सकते हैं:

• गंदे या खराब धुले चादरों का उपयोग करें.
• धब्बा को अच्छी तरह से सूखने न दें.
• बहुत लंबे समय के लिए फिक्सिंग समाधान छोड़ दें.
• धुंधला होने के अंत में अपर्याप्त धुलाई.
• उपयोग किए जा रहे डाई की अपर्याप्त निस्पंदन या गैर-निस्पंदन.

रूपात्मक कलाकृतियों की उपस्थिति

मॉर्फोलॉजिकल कलाकृतियां स्मीयरों में दिखाई दे सकती हैं, जिससे उपस्थित संरचनाओं की कल्पना और व्याख्या करना मुश्किल हो जाता है। इसकी वजह यह है:

• एंटीकोआगुलेंट का उपयोग किया जाता है, जैसे हेपरिन.
• गंदे, क्षतिग्रस्त या चिकना चादर का उपयोग.

भंडारण मोड

डाई तैयार करने के बाद कमरे के तापमान (15 - 25 डिग्री सेल्सियस) पर रखा जाना चाहिए, ताकि डाई को वेग से रोका जा सके। इसे एक बंद एम्बर कंटेनर में संग्रहीत किया जाना चाहिए.

संदर्भ

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7. "गिआमेसा दाग।" विकिपीडिया, मुक्त विश्वकोश. 1 सितंबर 2017, 01:02 यूटीसी। 6 दिसंबर 2018, en.wikipedia.org.