धुंधला धुंधला नींव, तकनीक और उपयोग करता है

धुंधला हो जाना प्रतिरोधक संरचनाओं को रंग देने के लिए उपयोग की जाने वाली कार्यप्रणाली है, जो प्रतिकूल परिस्थितियों में होने पर कुछ बैक्टीरिया का निर्माण करती हैं; ये संरचनाएं जीवित रहने के तरीके से मेल खाती हैं.

ऐसे कई जेनेरा हैं जो बीजाणुओं का निर्माण करते हैं; हालाँकि, मुख्य बेसिलस और क्लोस्ट्रीडियम हैं। ये पीढ़ी को अधिक प्रासंगिक माना जाता है क्योंकि उनके पास मनुष्यों के लिए रोगजनक प्रजातियां हैं.

प्रत्येक बेसिलस एक बीजाणु को जन्म दे सकता है। तैयारी की रंगाई के समय, बीजाणु को बैसिलस (एंडोस्पोर) के अंदर या इसके बाहर (एक्सोस्पोर) पाया जा सकता है। बैक्टीरिया के लिए पारंपरिक धुंधला तकनीक के साथ - जैसे ग्राम दाग - बीजाणु बेरंग रहते हैं.

वर्तमान में, कई रंग पद्धति हैं जो इसे रंगाने के लिए बीजाणु की मोटी संरचना को पार करने में सक्षम हैं। ये कार्यप्रणाली बहुत विविध हैं; इनमें से हम डॉर्न तकनीक, मोलर स्टेन और शेफ़र-फुल्टन पद्धति का उल्लेख कर सकते हैं, जिसे विर्त्ज़-कोंक्लिन भी कहा जाता है।.

वर्णित सभी तकनीकों में से, Shaeffer-Fulton कार्यप्रणाली का उपयोग दिनचर्या प्रयोगशालाओं में सबसे अधिक किया जाता है। इसका नाम दो माइक्रोबायोलॉजिस्टों पर दिया गया है, जिन्होंने 1930 में रंग निर्माण किया था: एलिसिया शेफ़र और मैकडोनाल्ड वाल्टन। हालांकि, कभी-कभी तकनीक को 1900 के दो जीवाणुविदों के सम्मान में विर्त्ज़-कॉंकलिन कहा जाता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 बीजाणु रंग तकनीक
  • २.१ डॉर्नर की तकनीक
  • 2.2 संशोधित डॉर्नर तकनीक
  • 2.3 शेफ़र-फुल्टन या विर्त्ज़-कॉंकलिन की तकनीक
  • 2.4 मोलर तकनीक
  • गर्मी के बिना 2.5 संशोधित मोलर तकनीक
• ३ उपयोग
  • 3.1 उदाहरण
• 4 संदर्भ

आधार

बीजाणु पारंपरिक रंग के साथ दाग नहीं करते हैं क्योंकि उनके पास बहुत मोटी दीवार है। बीजाणुओं की जटिल रचना अधिकांश रंगों के प्रवेश को रोकती है.

निम्नलिखित परतों का अध्ययन करने में बाहर बीजाणु मनाया रहे हैं: पहला exosporium, जो पतली बाहरी परत ग्लाइकोप्रोटीन द्वारा गठित है.

फिर छल्ली आता है, जो उच्च तापमान के प्रतिरोध प्रदान करता है, इसके बाद पेप्टिडोग्लाइकेन से बना प्रांतस्था। फिर आधार की दीवार होती है जो प्रोटोप्लास्ट की रक्षा करती है.

बीजाणु एक निर्जलित संरचना है जिसमें 15% कैल्शियम और डिपिकोलिनिक एसिड होता है। इसलिए, अधिकांश बीजाणु रंग तकनीक गर्मी के आवेदन पर आधारित हैं ताकि डाई मोटी संरचना में प्रवेश कर सके.

एक बार बीजाणु को रंगे जाने के बाद, यह डाई को खत्म नहीं कर सकता है। शेफ़र-फुल्टन तकनीक में, मैलाकाइट ग्रीन वनस्पति कोशिकाओं में प्रवेश करता है और, गर्मी के आवेदन पर, एन्डोस्पोर में प्रवेश करता है और एक्सोस्पोर भी.

पानी से धोते समय, डाई को वनस्पति कोशिका से हटा दिया जाता है। यह इसलिए होता है क्योंकि हरे रंग का मैलाकाइट डाई थोड़ा बुनियादी होता है, इसलिए यह वनस्पति सेल में कमजोर रूप से बांधता है.

दूसरी ओर, यह बीजाणु से बाहर नहीं निकल सकता है और अंत में सफारी के साथ बेसिलस विपरीत है। यह नींव बाकी तकनीकों के लिए मान्य है, जिसमें कुछ ऐसा ही होता है.

रंग भरने की तकनीक

बीजाणुओं को दागदार बनाने के लिए, आपके पास उस संदिग्ध तनाव की एक शुद्ध संस्कृति होनी चाहिए जिसका आप अध्ययन करना चाहते हैं.

24 घंटे के लिए संस्कृति को अत्यधिक तापमान के अधीन किया जाता है ताकि सूक्ष्मजीवों को फैलाने के लिए उत्तेजित किया जा सके। इसके लिए, संस्कृति को ओवन में 44 ° C पर या रेफ्रिजरेटर (8 ° C) में 24 या 48 घंटों के लिए रखा जा सकता है.

यदि बहुत अधिक समय का उल्लेख तापमान पर छोड़ दिया जाता है, तो केवल एक्सोस्पोर देखे जाएंगे, क्योंकि सभी एंडोस्पोरस ने बेकस को छोड़ दिया होगा.

समय के अंत में, बाँझ शारीरिक समाधान की कुछ बूंदों को एक साफ स्लाइड पर रखा जाना चाहिए। फिर फसल का एक छोटा हिस्सा लिया जाता है और एक अच्छा फैलाव बनाया जाता है. 

बाद में इसे सूखने के लिए छोड़ दिया जाता है, इसे गर्मी के लिए तय किया जाता है और इसे नीचे दी गई कुछ तकनीकों के साथ लगाया जाता है:

डोर्नर की तकनीक

1 - एक परखनली में तैयार आसुत जल में छिटपुट सूक्ष्मजीवों का संकेंद्रित निलंबन और फ़िल्टर किए गए किन्नौं फेनोलिक फुकसिन की एक समान मात्रा जोड़ें.

2- ट्यूब को 5 से 10 मिनट तक उबलते पानी से स्नान में रखें.

3-एक साफ स्लाइड पर, 10% निग्रोसिन जलीय घोल की एक बूंद के साथ पिछले निलंबन की एक बूंद को मिलाएं, उबला हुआ और फ़िल्टर्ड.

4- हल्के गर्मी के साथ जल्दी से फैलाएं और सुखाएं.

5- 100X उद्देश्य (विसर्जन) के साथ परीक्षा.

बीजाणु दाग ​​लाल और जीवाणु कोशिकाएं गहरे भूरे रंग की पृष्ठभूमि के खिलाफ लगभग बेरंग दिखाई देती हैं.

संशोधित डोर्नर तकनीक

1- स्पोर्युलेटेड माइक्रोऑर्गेनिज्म का एक सस्पेंशन स्लाइड पर फैलता है और हीट के लिए तय होता है.

2- नमूना फिल्टर पेपर की एक पट्टी के साथ कवर किया जाता है जिसमें फेनिक एसिड फुकसिन जोड़ा जाता है। बन्सन बर्नर की लौ के साथ 5 से 7 मिनट के लिए डाई को गर्म किया जाता है जब तक वाष्प की रिहाई उत्पन्न नहीं होती है। फिर कागज को हटा दिया जाता है.

3- तैयारी को पानी से धोएं और फिर अब्सॉर्बेंट पेपर से सुखाएं.

4- निगारोसिन या सुई को फैलाने के लिए दूसरी स्लाइड का उपयोग करके स्मीयर को 10% निग्रोसिन की पतली फिल्म से ढकें.

बीजाणुओं और जीवाणुओं द्वारा लिया गया रंगांकन वही है जो पूर्व कला में वर्णित है.

शेफ़र-फ़ुल्टन या विर्त्ज़-कॉंकलिन तकनीक

1- एक स्लाइड पर स्पोराइलेटेड सूक्ष्मजीव के निलंबन के साथ एक पतली फैलाव बनाएं और इसे गर्म करने के लिए ठीक करें.

2- स्लाइड को 5% मैलाकाइट ग्रीन के जलीय घोल से ढकें (शीट पर फिल्टर पेपर रखा जा सकता है).

३- भापसेन बर्नर की आंच पर गरम करें जिससे भाप निकल जाए और लौ को हटा दें। 6 से 10 मिनट के लिए ऑपरेशन दोहराएं। यदि प्रक्रिया के दौरान मैलाकाइट ग्रीन सॉल्यूशन बहुत अधिक वाष्पित हो जाता है, तो अधिक जोड़ा जा सकता है.

4- फिल्टर पेपर निकालें (यदि इसे रखा गया था) और पानी से धो लें.

5- स्लाइड को 30 सेकंड के लिए 0.5% जलीय सफारी के साथ कवर करें (तकनीक के कुछ प्रकार 0.1% जलीय सफारी का उपयोग करते हैं और इसे 3 मिनट के लिए छोड़ देते हैं).

इस तकनीक से बीजाणु हरे और बेसिली लाल होते हैं.

इसका नुकसान यह है कि युवा संस्कृतियों के एंडोस्पोर्स अच्छी तरह से दाग नहीं देते हैं, क्योंकि वे बेहद स्पष्ट या बेरंग दिखते हैं। इससे बचने के लिए, 48 घंटे के ऊष्मायन की संस्कृतियों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है.

मोलर तकनीक

1- स्मीयर को 2 मिनट के लिए क्लोरोफॉर्म से ढक दें.

2- क्लोरोफॉर्म का त्याग करें.

3 - 5 मिनट के लिए 5% क्रोमिक एसिड के साथ कवर करें.

4- डिस्टिल्ड वाटर से धोएं

5- शीट को फुकसिन-फेनोलिक कार्प के साथ कवर किया जाता है और वाष्प के उत्सर्जन तक बन्सेन बर्नर की लौ के संपर्क में आता है; फिर इसे कुछ क्षणों के लिए आंच से हटा दिया जाता है। ऑपरेशन को 10 मिनट तक पहुंचने तक दोहराया जाता है.

6- पानी से धो लें.

7- विघटित करने के लिए अम्लीकृत इथेनॉल (हाइड्रोक्लोरिक अल्कोहल) का उपयोग करें। इसे 20 या 30 सेकंड के लिए छोड़ दिया जाता है.

8- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं.

9- 5 मिनट के लिए मिथाइलीन ब्लू के साथ शीट को कवर करने वाला काउंटरैक्ट.

10- डिस्टिल्ड वॉटर से धोएं.

11- इसे सूखने के लिए छोड़ दिया जाता है और नमूने को माइक्रोस्कोप के नीचे ले जाया जाता है.

बीजाणु लाल और नीली बेसिली दिखते हैं। यह महत्वपूर्ण है कि वाष्पों को न डालें, क्योंकि वे विषाक्त हैं और लंबे समय में वे कार्सिनोजेनिक हो सकते हैं.

गर्मी के बिना संशोधित मोलर तकनीक

2007 में हयामा और उनके सहयोगियों ने मोलर तकनीक का एक संशोधन बनाया। वे डाई गर्म करने की कदम सफाया कर दिया और पृष्ठसक्रियकारक Tergitol समाधान carbol fuchsin-carbol मिलीलीटर 7 प्रति 10 2 बूंद के अलावा द्वारा बदल दिया। वही परिणाम प्राप्त हुए थे.

अनुप्रयोगों

, रंग बीजाणुओं एक बहुत ही मूल्यवान और रोगज़नक़ पहचान जानकारी के लिए उपयोगी प्रदान करता है दण्डाणु और वनस्पति सेल ख़राब या नहीं करने की क्षमता के भीतर एक ही आकार की उपस्थिति, स्थान के बाद से, डेटा है कि प्रजातियों पर मार्गदर्शन कर सकते हैं एक निश्चित लिंग के भीतर शामिल.

इस संदर्भ में, यह ध्यान देने योग्य है कि बीजाणु गोल या अंडाकार हो सकते हैं, वे केंद्र में स्थित हो सकते हैं या पैरासेंटरल, सबटर्मिनल या टर्मिनल स्थिति में भी हो सकते हैं।.

उदाहरण

- क्लोस्ट्रीडियम डिफिसाइल टर्मिनल स्थिति में एक अंडाकार बीजाणु बनाता है जो बेसिलस को विकृत करता है.

- का बीजाणु क्लोस्ट्रीडियम tertium यह अंडाकार है, बेसिलस को विकृत नहीं करता है और टर्मिनल स्तर पर स्थित है.

- का एन्डोस्पोर क्लोस्ट्रीडियम tetani यह टर्मिनल है और एक ड्रमस्टिक की उपस्थिति देते हुए, बेसिलस को ख़राब करता है.

- के बीजाणु क्लोस्ट्रीडियम बोटुलिनम, सी. histolyticum, सी. Novy और सी। सेप्टिकम वे गोल या उपदंश अंडाकार हैं और बेसिलस को ख़राब करते हैं.

- का एन्डोस्पोर क्लोस्ट्रीडियम सोर्डेली यह थोड़ी विकृति के साथ केंद्रीय स्थिति में स्थित है.

संदर्भ

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