आगर टीएसआई नींव, तैयारी और उपयोग करता है

टीएसआई आगर या आयरन ट्रिपल शुगर एक ठोस संस्कृति माध्यम है जो ग्राम नकारात्मक बेसिली की प्रारंभिक पहचान का मार्गदर्शन करने के लिए जैव रासायनिक परीक्षण के रूप में कार्य करता है। यह मौजूद शर्करा के किण्वन, और हाइड्रोजन सल्फाइड और गैस के उत्पादन पर आधारित है.

इसकी संरचना और नींव क्लिगेलर लोहे के परीक्षण के समान है, इस अंतर के साथ कि बाद में केवल ग्लूकोज और लैक्टोज होते हैं। इसके बजाय, जैसा कि नाम से पता चलता है, ट्रिपल आयरन आयरन में तीन किण्वनीय कार्बोहाइड्रेट होते हैं: ग्लूकोज, लैक्टोज और सुक्रोज।.

इसके अलावा, टीएसआई माध्यम में चार प्रोटीन डेरिवेटिव होते हैं जो इसे एक बहुत ही पौष्टिक अगर बनाते हैं: खमीर निकालने, मांस निकालने, पेप्टोन और प्रोटीज़ पेप्टोन। इसमें फेरस अमोनियम सल्फेट, सोडियम थायोसल्फेट, सोडियम क्लोराइड, फिनोल लाल और अगर शामिल हैं.

माध्यम में मौजूद ग्लूकोज को किण्वित करने के लिए एक सूक्ष्मजीव की अक्षमता तुरंत इसे एंटरोबैक्टीरिया परिवार से बाहर कर देती है। इसलिए, जीन और प्रजातियों का निर्धारण करने के लिए कौन सा पहचान मार्ग लिया जाना चाहिए, यह परीक्षण आवश्यक है.

प्रत्येक प्रयोगशाला यह तय करती है कि वह टीएसआई एगर या क्लिगलर अगर एगर के साथ काम करती है या नहीं.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • १.१ सोडियम क्लोराइड और अगर
  • 1.2 पीएच संकेतक (फिनोल लाल)
  • 1.3 प्रोटीन व्युत्पन्न (खमीर निकालने, मांस निकालने, पेप्टोन और प्रोटीज़ पेप्टोन)
  • 1.4 कार्बोहाइड्रेट का किण्वन (ग्लूकोज, लैक्टोज और सुक्रोज)
  • 1.5 गैस उत्पादन
  • 1.6 सोडियम थायोसल्फेट और लौह अमोनियम सल्फेट (हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन)
• 2 तैयारी
• ३ उपयोग
• 4 बीज
• 5 सीमाएँ
• 6 संदर्भ

आधार

हर एक यौगिक माध्यम के भीतर एक कार्य को पूरा करता है.

सोडियम क्लोराइड और अगर

माध्यम के आसमाटिक संतुलन को बनाए रखने के लिए सोडियम क्लोराइड आवश्यक है। जबकि आगर ठोस स्थिरता देता है.

PH संकेतक (फिनोल लाल)

तैयार माध्यम का पीएच 7.3 से संतुलित है और पीएच संकेतक (फिनोल लाल) 6.8 से नीचे पीला हो जाता है। इसका मतलब यह है कि शर्करा की किण्वन द्वारा उत्पादित एसिड की थोड़ी मात्रा लाल-नारंगी से पीले रंग में मध्यम हो जाएगी.

यदि किण्वन नहीं होता है, तो पेप्टोन्स के उपयोग से माध्यम का क्षारीकरण होगा, लाल-नारंगी लाल से बदल जाएगा.

प्रोटीन व्युत्पन्न (खमीर निकालने, मांस निकालने, पेप्टोन और प्रोटेक्ट पेप्टोन)

जब बैक्टीरिया टीएसआई अगर में मौजूद प्रोटीन को मेटाबोलाइज करते हैं, तो एमाइन्स का उत्पादन होता है जो मध्यम (मुख्य रूप से बेवल स्तर पर) क्षारीय होता है, क्योंकि प्रतिक्रिया को ऑक्सीजन की आवश्यकता होती है। अमेजन बेजल को मजबूत लाल रंग में बदल देता है.

लेकिन यह बैक्टीरिया की किण्वन कार्बोहाइड्रेट की क्षमता पर निर्भर करेगा या नहीं.

कार्बोहाइड्रेट की किण्वन (ग्लूकोज, लैक्टोज और सुक्रोज)

शर्करा के किण्वन का अध्ययन कई चित्र दे सकता है और प्रत्येक की अलग-अलग व्याख्या की जाती है। परीक्षण की व्याख्या सूक्ष्मजीवों को 3 श्रेणियों में विभाजित करती है: गैर-ग्लूकोज किण्वक, गैर-लैक्टोज किण्वक और लैक्टोज / सुक्रोज किण्वक.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि माध्यम में ग्लूकोज की मात्रा सीमित है, जबकि लैक्टोज और सुक्रोज की एकाग्रता 10 गुना अधिक है.

Enterobacteriaceae परिवार और अन्य ग्लूकोज-किण्वन सूक्ष्मजीवों के बैक्टीरिया इस चीनी को किण्वित करना शुरू कर देंगे क्योंकि यह ऊर्जा के लिए सबसे सरल कार्बोहाइड्रेट है।.

दूसरी ओर, लैक्टोज और सुक्रोज जटिल कार्बोहाइड्रेट हैं जिन्हें तोड़कर ग्लूकोज में परिवर्तित किया जाना चाहिए ताकि वे एम्बडेन-मेयेरहोफ चक्र में प्रवेश कर सकें.

-गैर-किण्वन ग्लूकोज सूक्ष्मजीव

जब inoculated सूक्ष्मजीव ग्लूकोज किण्वन करने में सक्षम नहीं है, बहुत कम अन्य कार्बोहाइड्रेट किण्वन कर सकते हैं। इसलिए, यहां एसिड नहीं बनते हैं, लेकिन पेप्टोन के उपयोग के कारण बेवेल में अमीन का गठन होता है.

इस मामले में बेवल एक मजबूत लाल में बदल जाता है और ट्यूब के नीचे अपरिवर्तित रह सकता है या पूरे लाल ट्यूब को छोड़कर भी क्षारीय हो सकता है.

व्याख्या: के / के का अर्थ है क्षारीय बेवल / क्षारीय या तटस्थ पृष्ठभूमि

लेख की शुरुआत में जो छवि है वह ट्यूब डी की छवि को देखें.

यह परिणाम इंगित करता है कि सूक्ष्मजीव एंटरोबैक्टीरिया परिवार से संबंधित नहीं है.

-लैक्टोज / सुक्रोज के गैर-किण्वन सूक्ष्मजीव

यदि बैक्टीरिया ग्लूकोज को किण्वित करने में सक्षम है, लेकिन लैक्टोज या सुक्रोज नहीं है, तो निम्न होगा:

जीवाणु लगभग 6 से 8 घंटे के बाद मौजूद सभी ग्लूकोज का उपभोग करेगा, जो बीवेल और टैको दोनों को अम्लीय करने में सक्षम है; यानी अगर, पूरी तरह से पीला पड़ गया होगा। लेकिन जब ग्लूकोज कम हो जाता है और लैक्टोज और सुक्रोज का उपयोग करने में असमर्थता होती है, तो बैक्टीरिया प्रोटीन का चयापचय शुरू कर देंगे.

इस प्रतिक्रिया को ऑक्सीजन की आवश्यकता होती है, इसलिए सतह (बीवेल) पर पेप्टोन का क्षरण होता है। अमीनों ने पीले से लाल रंग में बदलकर बेजल का उत्पादन किया। ऊष्मायन के 18 से 24 घंटों में इस प्रतिक्रिया का सबूत है.

व्याख्या: के / ए का अर्थ है क्षारीय बेवेल और एसिड टैको.

लेख की शुरुआत में जो छवि है उसमें ट्यूब बी की छवि देखें.

-लैक्टोज / सुक्रोज किण्वन सूक्ष्मजीव

जाहिर है, लैक्टोज और सुक्रोज को किण्वित करने में सक्षम सूक्ष्मजीव ग्लूकोज को किण्वित कर सकते हैं। माध्यम में मौजूद ग्लूकोज की न्यूनतम मात्रा समाप्त हो जाने के बाद, गठित पाइरूवेट क्रेब्स के एरोबिक चक्र के माध्यम से एसिड बनाने के लिए चयापचय करना शुरू कर देता है, और 8 से 12 घंटे की अवधि में सभी माध्यम पीले होंगे.

यदि बैक्टीरिया लैक्टोज या सुक्रोज को विभाजित करने में सक्षम है, तो एसिड का उत्पादन जारी रहेगा, और 18 से 24 घंटों के बाद पूरी ट्यूब - चोंच और टैको - पीले रहेंगे.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि ग्लूकोज का उपयोग दो तरीकों से किया जाता है: एक एरोबिक रूप में ट्यूब के बेवल में, और दूसरा एनारोबिक रूप से ट्यूब के नीचे.

व्याख्या: ए / ए का मतलब एसिड बेवेल / एसिड तल है। यह गैस को पेश कर सकता है या नहीं.

छवि में जो लेख की शुरुआत में है वह ट्यूब ए की छवि को देखें.

गैस का उत्पादन

कुछ सूक्ष्मजीव शर्करा के किण्वन के दौरान गैस बनाने में सक्षम हैं। गैस को नली में प्रत्यारोपित किया जाता है, जिससे यह आग के अंदर पहुंचती है। दबाव बुलबुले के गठन या अगर के विस्थापन का कारण बनता है। कभी-कभी गैस गठन मध्यम फ्रैक्चर कर सकता है.

यह महत्वपूर्ण है कि टीएसआई माध्यम को बोने के समय, पंचर को अग्र के केंद्र द्वारा सफाई से बनाया जाता है जब तक कि यह नीचे तक नहीं पहुंचता। यदि पंचर को ट्यूब की दीवारों की ओर मोड़ दिया जाता है, तो यह गैस के उत्पादन में झूठी सकारात्मकता पैदा कर सकता है, क्योंकि यह गलत तरीके से गठित चैनल के माध्यम से बच जाएगा.

गैस के उत्पादन के साथ-साथ अगर बेवल में होने वाली प्रतिक्रियाएं, ऑक्सीजन की आवश्यकता होती हैं, इसलिए यह सिफारिश की जाती है कि ट्यूब को एक कपास प्लग के साथ कवर किया जाए, और यदि एक बैक्लाइट ढक्कन का उपयोग किया जाता है, तो यह पूरी तरह से समायोजित नहीं होना चाहिए.

गैस उत्पादन को सकारात्मक (+) या नकारात्मक (-) के रूप में सूचित किया जाता है.

सोडियम थायोसल्फेट और फेरस अमोनियम सल्फेट (हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन)

हाइड्रोजन सल्फाइड (रंगहीन गैस) पैदा करने में सक्षम बैक्टीरिया, माध्यम में मौजूद सोडियम थायोसल्फेट के सल्फर को लेते हैं। एक बार H बनता है₂लौह लौह सल्फाइड का उत्पादन करने वाली लौह अमोनियम सल्फेट के साथ एस प्रतिक्रिया करता है (काला वेग स्पष्ट रूप से दिखाई देता है).

एच के उत्पादन₂एस को सकारात्मक (+) या नकारात्मक (-) के रूप में सूचित किया जाता है.

छवि में जो लेख की शुरुआत में है वह ट्यूब सी की छवि देखें.

तैयारी

निर्जलित तिगुनी शक्कर (टीएसआई) अगर का 62.5 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग.

जब तक अगर पूरी तरह से भंग न हो जाए तब तक गरम करें। एक मिनट के लिए उबाल लें अक्सर सरगर्मी। कपास के ढक्कन के साथ 13/100 परीक्षण ट्यूबों में मध्यम के 4 मिलीलीटर वितरित करें.

15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ। आटोक्लेव से निकालें और एक इच्छुक तरीके से आराम करने की अनुमति दें। ध्यान रखा जाना चाहिए कि आधार और बेज़ल दोनों की दूरी समान हो.

एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें 2-8 डिग्री सेल्सियस। बैक्टीरियल स्ट्रेन को लगाने से पहले संयम रखने की अनुमति दें.

निर्जलित माध्यम का रंग हल्का बेज है और तैयार माध्यम लाल-नारंगी है

तैयार माध्यम का अंतिम पीएच 7.3 prepared 0.2 है.

अनुप्रयोगों

टीएसआई परीक्षण का उपयोग माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला के स्तर पर व्यापक रूप से किया जाता है। यह परीक्षण उस प्रकार के परीक्षण के लिए आवश्यक है जिसे जीनस और प्रजातियों की पहचान में आने के लिए लागू किया जाना चाहिए। इसकी अच्छी निष्पादन और व्याख्या सामग्री और कार्य को बचा सकती है.

यदि परिणाम एक TSI K / K है और साइटोक्रोम ऑक्सीडेज परीक्षण सकारात्मक है, तो यह ज्ञात है कि परीक्षण का उपयोग गैर-किण्वन ग्राम नकारात्मक बेसिली की पहचान के लिए किया जाना चाहिए, जैसे कि Pseudomonas, Alcaligen, Achromobacter, Burkholderia, अन्य पीढ़ी के बीच। यदि यह ऋणात्मक ऑक्सीडेज है, तो यह जेनेरा एसीनेटोबैक्टीर, स्टेनोट्रोफोमोनास आदि की ओर उन्मुख है।.

दूसरी ओर, यदि एक TSI A / A या K / A प्राप्त किया जाता है और साइटोक्रोम ऑक्सीडेज परीक्षण नकारात्मक होता है, तो नाइट्राइट में नाइट्रेट्स कम हो जाते हैं, हम निश्चित रूप से कहेंगे कि यह Enterobacteriaceae परिवार से संबंधित एक सूक्ष्मजीव है। इस मामले में पहचान मार्ग बैक्टीरिया के इस समूह के लिए विशिष्ट परीक्षणों के लिए उन्मुख होगा.

दूसरी ओर, यदि एक के / ए या ए / ए छवि प्राप्त की जाती है और साइटोक्रोम ऑक्सीडेज परीक्षण सकारात्मक है, तो माउंट किए जाने वाले अतिरिक्त परीक्षणों को किण्वन उपभेदों की पहचान करने के लिए निर्देशित किया जाएगा जो एंटरोबैक्टीरिया परिवार से संबंधित नहीं हैं, जैसे: एरोमोनस, प्लेसिओमोनस, विब्रियो और पेस्टुरेला.

हाइड्रोजन सल्फाइड, नकारात्मक ऑक्सीडेज के साथ एक टीएसआई, एंटरोबैक्टीरिया परिवार के निम्नलिखित जेनेरा की पहचान को निर्देशित करेगा: प्रोटीन, सिट्रोबैक्टर, एडवर्ड्सियाला, लेमिनेरोला, प्रागिया, ट्रैबुसीला या साल्मोनेला.

क्षारीय बेवल के साथ क्षारीय बेवल में दुर्लभ या मध्यम हाइड्रोजन सल्फाइड वाला एक TSI ग्राम-नकारात्मक, गैर-किण्वन बेसिली उत्पादन एच की पहचान के लिए परीक्षणों के उपयोग को निर्देशित करेगा।₂एस, जैसे शीवनेला पुटेरसिएन्स.

अंत में, टीएसआई का उपयोग ग्राम पॉजिटिव बेसिली में हाइड्रोजन सल्फाइड के उत्पादन की जांच के लिए किया जा सकता है, खासकर जब यह संदिग्ध हो एरीसिपेलोथ्रिक्स रुसियोपैथिया.

लगाए

TSI माध्यम को शुद्ध कालोनियों के साथ सम्मिलित किया जाना चाहिए, प्राथमिक या चयनात्मक संस्कृतियों में पृथक किया जाएगा। यदि कॉलोनी को चयनात्मक मीडिया से लिया जाता है जो मिश्रित वनस्पतियों के साथ नमूनों के साथ लिया गया था, तो केवल सतह लेने के लिए देखभाल की जानी चाहिए, क्योंकि कॉलोनी के निचले हिस्से में उस माध्यम में व्यवहार्य उपभेद हो सकते हैं.

इसलिए, लूप को चयनात्मक माध्यम में ठंडा नहीं किया जाना चाहिए और फिर कॉलोनी को ले जाना चाहिए और टीएसआई माध्यम को टीका लगाना चाहिए.

रोपण सीधे लूप या सुई के साथ किया जाएगा। एक पंचर बनाया जाएगा, यह ध्यान रखते हुए कि यह नीचे तक पहुंचने तक मध्य के केंद्र के माध्यम से होता है, और फिर रोपण को एक ज़िगज़ैग तरीके से सतह को टीका लगाकर समाप्त किया जाता है। दो पंक्चर न करें.

18-24 घंटे के लिए एरोबायोसिस में 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं। इस समय, न तो पहले और न ही बाद में व्याख्या करें.

सीमाओं

ऊष्मायन के 18 से 24 घंटों के बीच टीएसआई परीक्षण पढ़ा जाना चाहिए। इस समय से पहले एक पढ़ना किण्वन ए / ए का एक गलत सकारात्मक संकेत दे सकता है। जबकि, इस समय के बाद एक पढ़ना, गैर-किण्वक की एक झूठी नकारात्मक छवि को जन्म दे सकता है, जो कि पेप्टोन्स की खपत के कारण होता है जो माध्यम को क्षारीय करता है.

संदर्भ

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