पापा डेक्सट्रोज फाउंडेशन, तैयारी और उपयोग

पापा dextrose agar यह एक ठोस, गैर-चयनात्मक पौष्टिक संस्कृति माध्यम है। यह बैक्टीरिया और कवक प्रजातियों को विकसित कर सकता है, लेकिन इसका उपयोग विशेष रूप से फिलामेंटस कवक और खमीर के अलगाव के लिए संकेत दिया गया है। इसे अंग्रेजी अभिव्यक्ति आलू डेक्सट्रोज एगर द्वारा पीडीए माध्यम के रूप में भी जाना जाता है.

यह विशेष रूप से फाइटोपैथोजेनिक कवक के अलगाव के लिए उपयोगी है, अर्थात, जो पौधों को प्रभावित करते हैं। संक्रमित पौधों से नमूने लेने के लिए, अन्य मीडिया जैसे कि साबाउड अगार या माल्टा अगर का उपयोग किया जा सकता है, हालांकि, नियमित उपयोग के लिए, अधिक स्पोरुलेशन के कारण आलू डेक्सट्रोज अगर पसंद किया जाता है।.

यह भी सौंदर्य प्रसाधन, फार्मास्यूटिकल्स और कुछ डेयरी खाद्य पदार्थों के नमूनों में कवक कालोनियों की गिनती के लिए प्रयोग किया जाता है। इसी तरह, यह डर्मेटोफाइट्स की खोज में त्वचा की छिलके के नमूनों को लगाने के लिए प्रचलित है, जो इस माध्यम में बहुत अच्छी तरह से विकसित होते हैं, जो उनकी विशेषता वर्णक विकसित करते हैं.

आलू डेक्सट्रोज माध्यम प्रयोगशाला में तैयार करने के लिए एक बहुत ही सरल और आसान है। इसमें शामिल है, जैसा कि नाम का अर्थ है, आलू जलसेक, डेक्सट्रोज़ और अगर-अगर। इसके अतिरिक्त, बैक्टीरिया के विकास को रोकने और फंगल प्रजातियों के लिए चयनात्मकता बढ़ाने के लिए निरोधात्मक पदार्थों को जोड़ा जा सकता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 तैयारी
  • २.१ - पापा डेक्सट्रोज अगर की होममेड (नॉन-कमर्शियल) तैयारी
  • २.२ - पापा डेक्सट्रोज अगर की व्यावसायिक तैयारी
• ३ उपयोग
  • 3.1 आलू डेक्सट्रोज अगर पर पौधे के नमूने लगाने की प्रक्रिया
  • 3.2 पापा डेक्सट्रोज अगर पर त्वचा, बाल या नाखून तराजू के नमूने लगाने की प्रक्रिया
  • 3.3 पहचान की प्रक्रिया
  • 3.4 कॉलोनी की गिनती
  • 3.5 कवक उपभेदों का रखरखाव
• 4 गुणवत्ता नियंत्रण
• 5 संदर्भ

आधार

पापा डेक्सट्रोज एगर एक संस्कृति माध्यम है जो फिलामेंटस कवक और खमीर के विकास के लिए आवश्यक पोषण तत्व प्रदान करता है.

ग्लूकोज के साथ आलू जलसेक का संयोजन कवक के संतोषजनक विकास के लिए ऊर्जा का सही स्रोत प्रदान करता है। जबकि आगर वह है जो पर्यावरण को स्थिरता प्रदान करता है.

अकेले माध्यम बैक्टीरिया के विकास को रोकता नहीं है, इसलिए यह एक गैर-चयनात्मक माध्यम है। इसे चयनात्मक बनाने के लिए आपको निरोधात्मक पदार्थों जैसे टार्टरिक एसिड या एंटीबायोटिक्स की आवश्यकता होती है.

तैयारी

-आलू डेक्सट्रोज एगर की होममेड (गैर-वाणिज्यिक) तैयारी

पेट्री डिश

इसे निम्नलिखित तरीके से तैयार किया जाता है:

सबसे पहले, आलू को बहुत अच्छी तरह से धोया जाता है, उनके पास मौजूद गंदगी को हटा देता है। वे सब कुछ और खोल के साथ पतली स्लाइस में काट रहे हैं। 200 ग्राम आलू को तौला जाता है और आधे घंटे के लिए आसुत पानी के एक लीटर में उबालने के लिए रखा जाता है.

समय के बाद एक धुंध के माध्यम से सभी तैयारी को फ़िल्टर या तनावपूर्ण किया जाता है.

प्राप्त तरल को आसुत जल के साथ पूरा किया जाता है जब तक कि यह एक लीटर तक नहीं पहुंचता। जलसेक के लिए, अगर-अगर और 20 ग्राम डेक्सट्रोज के 20 ग्राम को मिलाया जाता है, अच्छी तरह से मिलाया जाता है और 121 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 15 पाउंड दबाव में आटोक्लेव किया जाता है।.

50 ° C तक ठंडा होने दें और बाँझ पेट्री डिश में परोसें। तैयार प्लेटों को एक रेफ्रिजरेटर में संग्रहीत किया जाता है.

चोक

आप पापा डेक्सट्रोज अगर वेजेज भी तैयार कर सकते हैं.

इस मामले में, आटोक्लेव में स्टरलाइज़ करने से पहले, माध्यम के 12 से 15 मिलीलीटर ट्यूबों में रखे जाते हैं, फिर उन्हें आटोक्लेव किया जाता है और छोड़ने पर वे ठोस होने तक विशेष समर्थन पर झूठ बोलते हैं। फ्रिज में सेव करें.

मध्यम 5.6, 0.2 के पीएच पर रहता है, हालांकि, कुछ प्रयोगशालाएं बैक्टीरिया के विकास को रोकने के लिए पीएच को 3.1 to 0.1 से कम करने के लिए 10% टैटारिक एसिड जोड़ती हैं।.

इसी अर्थ में, अन्य प्रयोगशालाएं एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ना पसंद करती हैं ताकि यह कवक की खेती के लिए चयनात्मक हो और बैक्टीरिया के विकास को रोक सके.

-आलू dextrose agar की व्यावसायिक तैयारी

व्यावसायिक रूप से उपलब्ध निर्जलित माध्यम का 39 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। 5 मिनट के लिए आराम में छोड़ दें.

मिश्रण को उसके कुल विघटन तक बार-बार हिलाकर गर्म किया जाता है। इसके बाद 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में निष्फल.

प्लेट्स या वेजेज तैयार किए जा सकते हैं। जैसा कि ऊपर वर्णित है आगे बढ़ें.

पीएच 5.6। 0.2 पर रहता है। यदि 3.1 का पीएच वांछित है, तो प्लेटों पर परोसने से पहले 20% बाँझ टार्टरिक एसिड के 14 मिलीलीटर को जोड़ा जाना चाहिए।.

अप्रस्तुत माध्यम का रंग बेज है और तैयार हल्का सा एम्बर है जो थोड़े बादल या ओपलेसेंट उपस्थिति के साथ है.

अनुप्रयोगों

आलू डेक्सट्रोज अगर में पौधे के नमूने लगाने की प्रक्रिया

-धब्बों वाली पत्तियों के लिए

पत्तियों को टुकड़ों में काट दिया जाता है.

50% अल्कोहल के साथ 50cc गिलास में, पत्तियों के टुकड़ों (दाग और स्वस्थ) को रखें, सतह को 20 से 30 सेकंड के लिए कीटाणुरहित करें। शराब खींचो और 40 से 50 सेकंड के लिए 20% सोडियम हाइपोक्लोराइट जोड़ें यदि वे पतले पत्ते हैं और छाल और लॉग होने पर समय 80 सेकंड तक बढ़ाएं.

सोडियम हाइपोक्लोराइट खींचो और एक बाँझ क्लिप कीटाणुरहित टुकड़ों के साथ ले लो और उन्हें मध्यम (अधिकतम 10 टुकड़े) की सतह पर रखें। तारीख रखें और 20 से 30 डिग्री सेल्सियस सेते हैं.

-फल और कंद के लिए

यदि फल मांसल है, तो कवक से प्रभावित फल को खोलें और एक बाँझ स्केलपेल के साथ टुकड़े लें, दोनों रोगग्रस्त भाग और स्वस्थ भाग और इसे अगर की सतह पर रखें।.

यदि फल खट्टे हैं, जैसे कि नींबू या नारंगी, तो आपको अपने बीज खोलना और बोना चाहिए.

जब फल की सतह प्रभावित होती है और बीजाणु देखे जाते हैं, तो प्लेट पर कसा हुआ विधि का उपयोग करना सबसे अच्छा है; इसमें "एल" के रूप में एक स्पैटुला के साथ बीजाणु को स्पर्श किया जाता है जिसे निष्फल और ठंडा किया जाता है, और फिर अगर पर 2 से 3 बार बीजारोपण होता है.

-अनाज के लिए

पत्तियों में वर्णित के रूप में उन्हें कीटाणुरहित किया जाता है और फिर अगर पर रखा जाता है.

-शाखाओं और उपजी के लिए

छाल का एक स्क्रैपिंग किया जाता है और फिर स्वस्थ और रोगग्रस्त भाग के टुकड़ों को लिया जाता है और सीधे अगर पर बोया जाता है।.

बुवाई प्लेटें 72 घंटे के लिए 20-30 डिग्री सेल्सियस पर एरोबियोसिस में आरोपित की जाती हैं.

पापा डेक्सट्रोज अगर पर त्वचा, बाल या नाखून तराजू के नमूने लगाने की प्रक्रिया

नमूना को स्केलपेल ब्लेड नंबर 11 का उपयोग करके लिया जाना चाहिए, या तो डर्माटोफिक की तलाश में प्रभावित बाल, त्वचा के गुच्छे या नाखूनों को काटने के लिए। नमूना लेने से पहले, क्षेत्र को 70% शराब के साथ कीटाणुरहित किया जाना चाहिए.

-त्वचा का नमूना

पपड़ीदार घावों में घाव के किनारे को स्क्रैप किया जाना चाहिए, क्योंकि कवक को खोजने की अधिक संभावना है.

एक्सयूडेटिव घावों में नमूना को सूखा या गीला झाड़ू के साथ लिया जाता है। आलू डेक्सट्रोज अगर या सबाउरड अगर पर तुरंत बोएं। परिवहन के साधनों से बचें.

नमूने का एक अन्य तरीका मारियाट और अदन कैम्पोस की कालीन वर्ग तकनीक के माध्यम से है। इस मामले में प्रभावित क्षेत्र को आगे की खेती के लिए बाँझ ऊन के एक टुकड़े के साथ 5 बार रगड़ दिया जाता है.

नमूना सीधे संस्कृति माध्यम में रखा जा सकता है.

-बाल का नमूना

पैथोलॉजी के आधार पर, प्रभावित भाग को जड़ों से काट या फाड़ा जा सकता है। संस्कृति माध्यम में नमूना रखें.

-फिंगर्नेल नमूना

आप प्रभावित नाखून के एक विशिष्ट हिस्से को कुरेद या काट सकते हैं। यह चोट के प्रकार पर निर्भर करेगा.

कल्चर के माध्यम से कवक के संपर्क की संभावना को बढ़ाने के लिए बुवाई से पहले नमूना को 1 मिमी टुकड़ों में काटें.

पहचान की प्रक्रिया

कॉलोनियों के मैक्रोस्कोपिक अध्ययन (उपस्थिति, रंग, स्थिरता, विकास की डिग्री) को पूरा करने के लिए प्लेट में प्राप्त कालोनियों को आलू डेक्सट्रोज अगर युक्त ट्यूबों में अलग किया जाता है।.

माइक्रोस्कोपिक अध्ययन (संरचनाओं और उनके संरचनाओं का अवलोकन), लामिना और लामेला के बीच माइक्रोस्कोप के तहत माइक्रोकल्चर या प्रत्यक्ष अवलोकन द्वारा किया जा सकता है.

कॉलोनी की गिनती

इस माध्यम का उपयोग पौधों के नमूनों, भोजन, सौंदर्य प्रसाधन या दवाओं में मौजूद कवक और खमीर के भार को निर्धारित करने के लिए भी किया जा सकता है। इस प्रयोजन के लिए, एंटीबायोटिक दवाओं के साथ पूरक पापा डेक्सट्रोज एगर का उपयोग किया जाता है, जैसे: (क्लोरोफेनिकॉल, क्लोरोटेट्रासाइक्लिन या दोनों).

नमूना के 1 मिलीलीटर डालो - अधिमानतः पतला - एक बाँझ और खाली पेट्री डिश में, फिर एक आलू डेक्सट्रोज अगर प्लग को पिघलाएं और 45 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा होने दें। पेट्री डिश पर डालो और समरूपता तक बारी बारी से। इसे तब तक आराम से छोड़ दें जब तक यह जम न जाए.

20-25 डिग्री सेल्सियस (नए नए साँचे) या 30-32 डिग्री सेल्सियस (खमीर) पर 5 से 7 दिनों या उससे अधिक के लिए एरोबायोसिस में सेवारत, कवक के प्रकार और मांग के प्रकार पर निर्भर करता है। दो प्लेटों का उपयोग दोनों तापमान रेंज में सेते हैं.

कवक उपभेदों का रखरखाव

पापा डेक्सट्रोज अगर का उपयोग कई वर्षों तक व्यवहार्य कवक उपभेदों को बनाए रखने के लिए किया जा सकता है.

ऐसा करने के लिए, फफूंद की खेती पापा डेक्सट्रोज अगर वेजेज में की जाती है और कवक के बड़े हो जाने के बाद, इसे खनिज तेल से ढक दिया जाता है। तेल को 45 मिनट के लिए एक आटोक्लेव में निष्फल होना चाहिए, और 300 से 330 साइबोल्ट की अनुमानित चिपचिपाहट होनी चाहिए। तेल 1 से 2 सेमी तक बेवेल टिप से अधिक होना चाहिए.

गुणवत्ता नियंत्रण

प्रत्येक तैयार बैच से एक या दो प्लेटें ली जानी चाहिए और २५ डिग्री सेल्सियस पर ४ hours घंटे या २० डिग्री सेल्सियस पर ९ ६ घंटे तक इनक्यूबेट करना चाहिए। एक अच्छा बाँझपन नियंत्रण वह है जिसमें कॉलोनियों का विकास नहीं होता है.

ज्ञात या प्रमाणित नियंत्रण उपभेद जैसे:

सैक्रोमाइसेस सेरेविसिया एटीसीसी 9763, कैंडिडा अल्बिकंस एटीसीसी 10231, एस्परगिलस ब्रासीलेंसिस ATCC 16404, ट्राइकोफाइटन मेंटाग्रोफाइट्स एटीसीसी 9533. सभी मामलों में अच्छी वृद्धि की उम्मीद है.

संदर्भ

1. प्रयोगशालाओं ब्रिटानिया। पापा ग्लूकोसादो अगर। 2015 में उपलब्ध: britanialab.com
2. नियोजन प्रयोगशालाएँ आलू डेक्सट्रोज अगर। पर उपलब्ध: foodsafety.neogen.com
3. इंसुमोलाब प्रयोगशाला आलू dextrose agar। पर उपलब्ध: insumolab.cl
4. फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए (2009)। बेली एंड स्कॉट का माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 12 एड। संपादकीय पानामेरिकाना एस.ए. अर्जेंटीना.
5. कैसस-रिनकोन जी। सामान्य माइकोलॉजी। 1994. दूसरा एड। यूनिवर्सिडेड सेंट्रल डे वेनेजुएला, लाइब्रेरी एडिशन। वेनेजुएला, कराकस.
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