Agar Sabouraud नींव, तैयारी और उपयोग करता है

सबौरद आगर, सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर के रूप में भी जाना जाता है, यह एक ठोस संस्कृति का माध्यम है, विशेष रूप से खमीर, मोल्ड्स और डर्माटोफाइट्स जैसे कवक के अलगाव और विकास के लिए समृद्ध है।.

इसलिए, नैदानिक ​​या गैर-नैदानिक ​​नमूनों से या तो रोगजनक या अवसरवादी कवक की उपस्थिति की जांच करने के लिए इस साधन का अभाव एक माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला में नहीं हो सकता है। इसी तरह, यह स्ट्रेप्टोमी और नोकार्डिया जैसे फिलामेंटस बैक्टीरिया के विकास के लिए भी आदर्श है। इसका उपयोग बहुत व्यापक है, इसका उपयोग मानव, पशु, पौधे और औद्योगिक माइकोलॉजी में किया जा सकता है.

इस माध्यम का निर्माण 1896 में प्रसिद्ध त्वचा विशेषज्ञ रायमंड सबाउड द्वारा किया गया था, जो मुख्य रूप से डर्माटोफाइट्स के कारण खोपड़ी के विकारों के विश्व-प्रसिद्ध विशेषज्ञ बन गए थे।.

इसका निर्माण इतना महत्वपूर्ण था कि तब से इसका उपयोग किया जाता है और यह आज भी जारी है, हालांकि कुछ संशोधनों के साथ.

यद्यपि यह कवक के लिए विशेष है, इस माध्यम में बैक्टीरिया विकसित हो सकते हैं, इसलिए मिश्रित वनस्पतियों के साथ नमूनों के लिए उनकी तैयारी में एंटीबायोटिक दवाओं को शामिल करने की आवश्यकता होती है और इस तरह बैक्टीरिया वनस्पतियों के विकास को रोकते हैं जो मौजूद हो सकते हैं.

एंटीबायोटिक का चयन देखभाल के साथ किया जाना चाहिए और उस प्रकार के कवक को ध्यान में रखना चाहिए जिसे आप ठीक करना चाहते हैं, क्योंकि कुछ पदार्थों की उपस्थिति में कुछ को बाधित किया जाता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 एंटीबायोटिक दवाओं के साथ साबौड्र डेक्सट्रोज अगर का सबसे अधिक इस्तेमाल किया संयोजन
• 2 तैयारी
  • २.१ डेक्सट्रोज़ सबाउड्र अगार 
  • २.२ सबाउड्र डेक्स्ट्रोस आगर (एममन्स का संशोधन)
  • २.३ क्लोरोफेनिकॉल के साथ सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर (एम्मन्स का संशोधन)
  • 2.4 डेक्सट्रोज़ सबाउड्र इमोंस साइकर विथ साइक्लोहाइडसाइड
  • २.५ डेक्सट्रोज़ सबाउड्र अगार (इममन्स) क्लोरमफेनिकॉल और साइक्लोहिमेसिड के साथ
  • 2.6 अन्य एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ा जा सकता है
• 3 विशेष विचार
• 4 गुणवत्ता नियंत्रण
• 5 का उपयोग करता है
  • ५.१ प्राथमिक खेती
  • 5.2 स्पोरुलेशन
  • ५.३ संरक्षण
  • ५.४ माइक्रोकल्चर
  • ५.५ मानव मायकोलॉजी में
  • 5.6 पशु माइकोलॉजी
  • 5.7 पर्यावरण संबंधी माइकोलॉजी
  • 5.8 औद्योगिक माइकोलॉजी
  • 5.9 प्लांट माइकोलॉजी
• 6 संदर्भ

आधार

Sabouraud dextrose agar एक ऐसा माध्यम है जो अपने मूल निर्माण में कमजोर रूप से चयनात्मक है, इसकी अम्लीय पीएच 5.6 of 0.2 के कारण, हालांकि बैक्टीरिया अभी भी विकसित हो सकते हैं, मुख्य रूप से लंबे समय तक ऊष्मायन में।.

माध्यम में कैसिइन पेप्टोन और अग्नाशयी पचा पशु ऊतक होते हैं, जो सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए कार्बन और नाइट्रोजन स्रोत प्रदान करते हैं.

इसमें ग्लूकोज की एक उच्च सांद्रता भी होती है, जो एक ऊर्जा स्रोत के रूप में कार्य करती है, जो बैक्टीरिया पर कवक के विकास के पक्ष में है। सभी को अगर-अग्र के साथ मिलाया जाता है, एक घटक जो सही स्थिरता प्रदान करता है.

दूसरी ओर, एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ दिया जाए तो सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर चयनात्मक हो सकता है.

एंटीबायोटिक दवाओं के साथ यह घाव के नमूने, खुले अल्सर या किसी भी नमूने में विशेष रूप से उपयोगी है जिसमें बड़े जीवाणु संदूषण का संदेह है.

एंटीबायोटिक दवाओं के साथ सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर का सबसे अधिक इस्तेमाल किया संयोजन

-क्लोरोफेनिकॉल के साथ साबूदाना अगर: खमीर और फिलामेंटस कवक को ठीक करने के लिए आदर्श.

-जेंटामाइसिन और क्लोरैमफेनिकॉल के साथ साबुदरा अगार: इस माध्यम में लगभग सभी फिलामेंटस कवक और खमीर विकसित होते हैं, और एंटरोबैक्टीरिया, स्यूडोमोनस और स्टैफिलोकोकस सहित बड़ी संख्या में बैक्टीरिया को रोकते हैं।.

-साइक्लोहाइडसाइड के साथ साबूदाना अगार: यह विशेष रूप से त्वचा या श्वसन पथ के नमूनों के लिए उपयोगी है, जब तक कि संदेह मंद फफूंदी है.

Cycloheximide का उपयोग सावधानी के साथ किया जाना चाहिए; यद्यपि इसका उपयोग गैर-रोगजनक या पर्यावरणीय कवक और खमीर के विकास को बाधित करने के लिए किया जाता है, जो एक नमूने में संदूषक के रूप में मौजूद हो सकता है, यह कुछ कवक के विकास को भी रोकता है जैसे क्रिप्टोकोकस नियोफ़ॉर्मन्स,  एस्परगिलस फ्यूमिगेटस, एलेसर्चरिया बॉयडी, पेनिसिलियम एसपी और अन्य अवसरवादी कवक.

-क्लोरोफेनिकॉल प्लस साइक्लोहाइडसाइड के साथ सबरौड अगर: का उपयोग मुख्य रूप से डिमॉर्फिक डर्माटोफाइट्स और कवक को अलग करने के लिए किया जाता है। इसका नुकसान यह है कि यह अवसरवादी कवक की कुछ प्रजातियों को रोकता है कैंडिडा कोई अल्बिकंस नहीं, एस्परगिलस, ज़ीगोमाइसिस या सी. neoformans.

-क्लोरोफेनिकॉल, स्ट्रेप्टोमाइसिन, पेनिसिलिन जी और साइक्लोहाइडसाइड के साथ साबूदाद अगार: यह बैक्टीरिया और सैप्रोफाइटिक कवक के साथ बेहद दूषित नमूनों के लिए आदर्श है, लेकिन इसका नुकसान यह है कि यह विकास को रोकता है एक्टिनोमाइसेस और नोकार्डियस, ऊपर उल्लिखित अवसरवादी मशरूम के अलावा.

तैयारी

यदि आपके पास अलग से सामग्री है तो आप इसे निम्नलिखित तरीके से तैयार कर सकते हैं:

डेक्सट्रोज अगर सबौरड 

अफसोस:

- 40 जीआर डेक्सट्रोज

- पेप्टोन के 10 ग्राम

- आगर-आगर की 15 जीआर

- आसुत जल के 1000 मिलीलीटर को मापें

सभी अवयवों को मिश्रित किया जाता है, पीएच को 5.6 तक समायोजित किया जाता है। उबलते हुए विलेय को भंग करें, मध्यम के 20 मिलीलीटर को 25 x 150 मिमी की ट्यूबों में, बिना निकला हुआ किनारा और कपास से अधिमानतः वितरित करें.

उपलब्धता के आधार पर अन्य ट्यूब आकारों का भी उपयोग किया जा सकता है.

वे दबाव के माहौल (121 डिग्री सेल्सियस) पर 10 मिनट के लिए स्वत: स्फूर्त होते हैं। आटोक्लेव समय से अधिक न हो। आटोक्लेव छोड़ते समय, ट्यूबों को एक समर्थन के साथ झुकाया जाता है जब तक कि वे एक बांसुरी चोटी में जम नहीं जाते।.

एक अन्य तरीका यह है कि उबाल आने तक सामग्री को गर्म करके भंग कर दें। 10 मिनट के लिए एक ही आटोक्लेव फियोला में और फिर पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर वितरित करें.

यदि एक सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर माध्यम उपलब्ध है, जिसमें पहले से ही सभी सामग्री शामिल हैं, तो हम वाणिज्यिक घर द्वारा निर्दिष्ट मात्रा को एक लीटर पानी के लिए तौलना चाहते हैं। बाकी चरण वही हैं जो ऊपर वर्णित हैं.

डेक्सट्रोज़ अगर सबौर्ड (एममन्स का संशोधन)

अफसोस:

-  20 जीआर डेक्सट्रोज

- पेप्टोन के 10 ग्राम

-  अगार-अगार की 17 जीआर

-  आसुत जल के 1000 मिलीलीटर को मापें

सभी अवयवों को मिश्रित किया जाता है, पीएच 6.9 को समायोजित किया जाता है। पिछले मामले की तरह ही आगे बढ़ें.

ऐसे वाणिज्यिक घर हैं जो सभी अवयवों के साथ मध्यम की पेशकश करते हैं। इस मामले में, डालें और डालें के रूप में तैयार करें.

क्लोरोफेनिकॉल के साथ सबौरड डेक्सट्रोज एगर (एम्मन्स का संशोधन)

क्लोरैमफेनिकॉल स्टॉक समाधान

- क्लोरैमफेनिकॉल बेस के 500 मिलीग्राम वजन

- 100% 95% इथेनॉल को मापें

- मिश्रण

सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर माध्यम (एम्मन्स) ऊपर वर्णित के रूप में तैयार किया गया है और इसके अलावा, मध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए, ऑटोकैवलिंग से पहले क्लोरैमफेनिकॉल स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें।.

डेक्सट्रोस आगर सबाउड्र इमोंस विथ साइक्लोहाइडसाइड

Cycloheximide स्टॉक समाधान

- साइक्लोहाइडसाइड का 5 ग्राम वजन

- 100 मिलीलीटर एसीटोन की माप करें

- मिश्रण

Sabouraud dextrose agar माध्यम (Emmons) पहले से ही वर्णित है और इसके अलावा माध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए autoclaving से पहले cycloheximide स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर जोड़ें.

क्लोरोफेनिकॉल और साइक्लोहेसेमाइड के साथ सबाउड्र डेक्सट्रोज एगर (एममन्स)

Sabouraud dextrose agar माध्यम (Emmons) ऊपर वर्णित के रूप में तैयार किया गया है और इसके अलावा माध्यम के प्रत्येक लीटर के लिए क्लोरोफेनिकॉल स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर और साइक्लोहाइडसाइड स्टॉक समाधान के 10 मिलीलीटर को ऑटोकैवलिंग से पहले जोड़ें.

अन्य एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ा जा सकता है

मध्यम प्रति लीटर पेनिसिलिन की 20,000 से 60,000 इकाइयाँ.

मध्यम प्रति लीटर 30 मिलीग्राम स्ट्रेप्टोमाइसिन.

मध्यम ठंडा होने के बाद दोनों को शामिल किया जाना चाहिए, थोड़ा ठंडा (50-55 डिग्री सेल्सियस).

माध्यम की प्रति लीटर नियोमाइसिन 0.04 ग्राम.

माध्यम की प्रति लीटर जेंटामाइसिन की 0.04 ग्राम.

विशेष विचार

सुरक्षा के लिए इसे पेट्री डिशों के बजाय वेज के आकार की ट्यूबों (बांसुरी की चोटी में झुका हुआ) में साबूदाना डेक्सट्रोज एगर को लगाने के लिए पसंद किया जाता है, ताकि फैलाव और फैलाव से बचा जा सके।.

यह महत्वपूर्ण है कि सबाउरड अगर के साथ ट्यूब को कपास से ढंका जाना चाहिए, न कि स्क्रू कैप के साथ, क्योंकि यह दिखाया गया है कि सेमिनोरोबिक स्थितियां कुछ उपभेदों में बीजाणुओं के निर्माण को रोकती हैं, उदाहरण के लिए Coccidioides immitis. इसके अलावा, अधिकांश कवक एरोबिक हैं.

यदि स्क्रू कैप का उपयोग करते हैं, तो कसकर बंद न करें.

गुणवत्ता नियंत्रण

तैयार मीडिया को अपने उचित कामकाज को सत्यापित करने के लिए गुणवत्ता नियंत्रण होना चाहिए। यह अंत करने के लिए, कुछ नियंत्रण उपभेदों बोया जाता है.

क्लोरोफेनिकॉल ATCC उपभेदों के साथ Sabouraud dextrose Agar के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। कैंडिडा अल्बिकंस, जिसमें उत्कृष्ट वृद्धि होनी चाहिए। एक और प्लेट उपभेदों के साथ inoculated है Escherichia कोलाई की, पूरी तरह से बाधित होना चाहिए.

एक असंक्रमित प्लेट को ऊष्मायन किया जाता है जिसमें कोई सूक्ष्मजीव विकसित नहीं होना चाहिए.

क्लोरोफेनिकॉल और साइक्लोहेक्साइड के साथ सबरोड डेक्सट्रोज अगर का इस्तेमाल किया जा सकता है  ट्राइकोफाइटन मेंटाग्रोफाइट्स, अच्छी तरह से विकसित करना चाहिए। एक और प्लेट एक तनाव के साथ inoculated है एस्परगिलस फ्लैवस, जिसमें कम वृद्धि या कोई वृद्धि नहीं होनी चाहिए। इसके अतिरिक्त, एक बाँझ प्लेट को अपनी बाँझपन प्रदर्शित करने के लिए ऊष्मायन किया जाता है.

सबलौड डेक्सट्रोज अगर के लिए साइक्लोहाइडसाइड, उपभेदों के साथ कैंडिडा अल्बिकंस, ट्राइकोफाइटन रूब्रम  या माइक्रोस्पोरम कैनिस, जिसे अच्छी वृद्धि दिखानी चाहिए.

इसी तरह, एक तनाव एस्परगिलस फ्लैवस, विकास या कोई विकास नहीं दिखा रहा है। अंत में बाँझपन नियंत्रण के लिए एक uninoculated प्लेट सेते हैं.

अनुप्रयोगों

प्राथमिक खेती

क्लासिक सबाउरड डेक्सट्रोज अगर में 4 ग्राम डेक्सट्रोज होता है और यह प्राथमिक अलगाव माध्यम के रूप में उत्कृष्ट है, क्योंकि यह प्रत्येक कवक की विशेषता आकृति विज्ञान को दर्शाता है.

यह पिगमेंट के उत्पादन को प्रदर्शित करने के लिए भी उत्कृष्ट है। हालांकि, यह स्पोरुलेशन का पालन करने के लिए सबसे उपयुक्त साधन नहीं है.

यह भी विकसित करने के लिए अनुशंसित नहीं है ब्लास्टोमाइसेस डर्माटिटिडिस, जो ग्लूकोज की उच्च सांद्रता से बाधित होता है.

दूसरी ओर, खेती के लिए कुछ खास बातों को ध्यान में रखा जाना चाहिए.

कुछ कवक कमरे के तापमान पर बेहतर विकसित होते हैं, जैसे कि नए नए साँचे, अन्य 37 डिग्री सेल्सियस पर सफलतापूर्वक विकसित होते हैं, जैसे कुछ खमीर, और अन्य दोनों तापमानों पर विकसित हो सकते हैं (डाइमर्फिक कवक).

इस कारण से, कभी-कभी एक ही नमूने के लिए कई सबाउडर अगर प्लेटों का उपयोग करना आवश्यक होता है, क्योंकि वे अक्सर एक प्लेट को कमरे के तापमान पर और दूसरी प्लेट को 37 ° C पर सेते हैं।.

उदाहरण के लिए, Sporothrix schenckii इसे दो प्लेटों में बोया जाता है; मोल्ड के चरण को प्राप्त करने के लिए कमरे के तापमान पर एक को ऊष्मायन किया जाता है और दूसरे को खमीर जैसे चरण को प्राप्त करने के लिए 37 ° C पर ऊष्मायन किया जाता है, लेकिन बाद में माध्यम में 5% रक्त जोड़ना आवश्यक है.

अन्य मामलों में, जैसे कि माइसेटोमस के नमूनों में, सबाउड्र अगार की दो प्लेटें बुवाई की जाती हैं, एक क्लोरैमफेनिकॉल के साथ और दूसरी साइक्लोहाइडसाइड के साथ। पहला कवक मूल (मायिकमेटोमा) के माइकोटोमा के प्रेरक एजेंटों की वृद्धि की अनुमति देगा और दूसरा एक्टिनोमाइसेटोमा जैसे जीवाणु मूल के माइसेटोमस का प्रेरक एजेंट।.

sporulation

एममन्स द्वारा संशोधित डेक्सट्रोज़ सबाउड्र अगार में डेक्सट्रोज़ के 2 ग्राम होते हैं और न केवल अलगाव के लिए उपयोग किया जाता है, बल्कि कवक के संरक्षण और संरक्षण के लिए भी उपयोग किया जाता है।.

इस माध्यम में यदि आप तनाव को ठीक कर सकते हैं ब्लास्टोमाइसेस डर्माटिटिडिस.

संरक्षण

फंगल संस्कृतियों को संरक्षित करने के लिए एक रेफ्रिजरेटर (2-8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत किया जा सकता है। भंडारण का समय 2 से 8 सप्ताह के बीच भिन्न हो सकता है। इस समय के बाद उन्हें प्रक्रिया को दोहराने के लिए उपसंस्कृत होना चाहिए.

कुछ कवक को कमरे के तापमान पर सबसे अच्छा बनाए रखा जाता है, जैसे कि एपिडर्मोफाइटन फोकोसम, ट्राइकोफाइटन स्कोएंलेनिनी, टी। वायलेसियम और माइक्रोस्पोरम ऑडीओनी.

अगर मल को पूरी तरह से अग्र से हटा दिया जाए और अगर सूखने से बचने के लिए माध्यम में अगर की मात्रा कम हो जाए तो स्ट्रेन का रखरखाव फुफ्फुसीयता से बचने के लिए लंबा किया जा सकता है.

microcultures

कुछ फिलामेंटस कवक की पहचान के लिए यौन और अलैंगिक प्रजनन की संरचनाओं का निरीक्षण करने के लिए सबाउरड अगर या अन्य विशेष साधनों का उपयोग करके माइक्रोकल्चर को करना आवश्यक है.

मानव माइकोलॉजी में

इसका उपयोग मुख्य रूप से कवक रोगों के निदान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से वे जो त्वचा और उसके आस-पास (बालों और नाखूनों) को प्रभावित करते हैं।.

नमूने स्राव, exudates, त्वचा, बाल, नाखून, थूक, CSF या मूत्र हो सकते हैं। आमतौर पर पृथक किए गए रोगजनकों में डर्माटोफाइट्स, कवक हैं जो चमड़े के नीचे और प्रणालीगत फंगल संक्रमण का कारण बनते हैं.

पशु की माइकोलॉजी

पशु अक्सर फंगल संक्रमण से प्रभावित होते हैं, इसलिए साबुदार अगार पशु में उतना ही उपयोगी है जितना कि मानव माइकोलॉजी में।.

उदाहरण के लिए, डर्माटोफाइट्स अक्सर जानवरों को प्रभावित कर सकते हैं। इस तरह का मामला है माइक्रोस्पोरम कैनिस वर् डिस्टोर्टम, जो अक्सर कुत्तों, बिल्लियों, घोड़ों, सूअरों और बंदरों को संक्रमित करता है। भी, माइक्रोस्पोरम जिप्सम कुत्तों, बिल्लियों और मवेशियों को संक्रमित करता है.

मुर्गियां, मुर्गा और मुर्गियां जैसे पक्षी इससे प्रभावित होते हैं माइक्रोस्पोरम गैलिना.

अन्य मशरूम, जैसे ज़ायमोनेमा फ़ाइकिमिनोसम, वे जानवरों में बीमारी का कारण भी हैं, मुख्य रूप से घोड़े, खच्चरों और गधों में, लसीका वाहिकाओं में एक महत्वपूर्ण सूजन पैदा करना.

स्पोरोथ्रिक्स शेंकी और हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलटम घरेलू और मानव जानवरों को प्रभावित करते हैं.

पर्यावरण संबंधी माइकोलॉजी

कई रोगजनक या अवसरवादी कवक किसी दिए गए वातावरण में किसी भी समय केंद्रित हो सकते हैं, विशेष रूप से क्लीनिक और अस्पतालों के ऑपरेटिंग कमरे और गहन चिकित्सा इकाइयों (आईसीयू) में। इसलिए, उन्हें नियंत्रित करना आवश्यक है.

अन्य कमजोर स्थान पुस्तकालय और पुरानी इमारतें हैं, जो पर्यावरणीय कवक की एकाग्रता से प्रभावित हो सकते हैं.

पर्यावरण अध्ययनों में फफूंदी के अलगाव के लिए सबाउड्र डेक्सट्रोज अगर का उपयोग किया जाता है.

औद्योगिक माइकोलॉजी

सौंदर्य प्रसाधन, खाद्य, पेय पदार्थ, चमड़ा, कपड़ा, के उत्पादन में फंगल दूषित पदार्थों के अध्ययन के लिए साबूदाना डेक्सट्रोज अगर गायब नहीं हो सकता है.

पौधा माइकोलॉजी

पौधों को कवक के कारण होने वाली बीमारियों का भी सामना करना पड़ता है, जो पौधे के विभिन्न हिस्सों को प्रभावित करता है, जिससे फसल भी खत्म हो सकती है, जिससे कृषि में बड़े नुकसान हो सकते हैं.

संदर्भ

1. क्वेंका एम, गादिया I, मार्टीन ई, पेमन जे, पोंटन जे, रोड्रिगेज (2006)। एंटीकोफंगल के लिए माइकोसिस और संवेदनशीलता अध्ययन का माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। संक्रामक रोगों और नैदानिक ​​माइक्रोबायोलॉजी के स्पेनिश सोसायटी की सिफारिशें। यहाँ उपलब्ध है: coesant-seimc.org
2. ValteK प्रयोगशाला। (2009)। साइक्लोहाइड्समाइड के साथ सबौरड डेक्सट्रोज एगर। पर उपलब्ध: andinamedica.com.
3. नवारो ओ। (2013)। पशु चिकित्सा माइकोलॉजी। राष्ट्रीय कृषि विश्वविद्यालय। निकारागुआ.
4. फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए। 2009. बेली एंड स्कॉट का माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 12 एड। अर्जेंटीना। पानामेरिकाना S.A संपादकीय
5. कैसस-रिनकोन जी। सामान्य माइकोलॉजी। 1994. दूसरा एड। यूनिवर्सिडेड सेंट्रल डे वेनेजुएला, लाइब्रेरी एडिशन। वेनेजुएला, कराकस.