Agar Müeller Hinton नींव, तैयारी और उपयोग करता है

म्यूलर हिंटन आगर यह एक ठोस, गैर-चयनात्मक पोषक माध्यम है, जो मांस जलसेक, कैसिइन एसिड पेप्टोन, स्टार्च, अगर और आसुत जल से बना है। यह माध्यम सबसे तेजी से विकसित होने वाले जीवाणुओं के एक उत्कृष्ट माइक्रोबियल विकास की अनुमति देता है.

यह मूल रूप से जॉन हॉवर्ड मुलर और जेन हिंटन द्वारा बनाया गया था, ताकि पोषण की मांग वाले बैक्टीरिया को अलग किया जा सके, जैसे कि निसेरिया गोनोरिया और निसेरिया मेनिंगिटिडिस. हालांकि, अपनी विशेषताओं के कारण यह एंटीबायोटिक दवाओं के लिए संवेदनशीलता के अध्ययन के लिए आदर्श निकला, विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्रदान करता है.

इस कारण से, मुलर हेल्टन अगार किर्बी डिस्क प्रसार विधि द्वारा रोगाणुरोधी अतिसंवेदनशील परीक्षण के निष्पादन के लिए क्लिनिकल एंड लेबोरेटरी स्टैंडर्ड इंस्टीट्यूट (सीएलएसआई) और रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण पर यूरोपीय समिति द्वारा स्वीकृत संस्कृति माध्यम है। Bauer.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 तैयारी
• ३ उपयोग
  • 3.1 रोगाणुरोधी तकनीक
  • 3.2 म्यूलर हिंटन आगर पर डिस्कशन का रणनीतिक प्लेसमेंट
• 4 गलत परिणामों के कारण
• 5 सीमा
• 6 गुणवत्ता नियंत्रण
• 7 संदर्भ

आधार

क्योंकि यह एक गैर-चयनात्मक पोषक माध्यम है, यह अधिकांश रोगजनक बैक्टीरिया के विकास के लिए उत्कृष्ट है.

दूसरी ओर, इसकी सरल रचना पदार्थों को आसानी से उस पर फैलती है, जो डिस्क प्रसार विधि द्वारा संवेदनशीलता परीक्षण के लिए एक आवश्यक विशेषता है।.

इसकी एक और विशेषता यह है कि इसमें कम मात्रा में अवरोधक होते हैं, जो सल्फोनामाइड्स, ट्राइमेथोप्रिम और टेट्रासाइक्लिन को प्रभावी रूप से मूल्यांकन करने की अनुमति देता है।.

हालांकि, यह ध्यान में रखना चाहिए कि माध्यम को अपने उचित कामकाज को सुनिश्चित करने के लिए कुछ शर्तों को पूरा करना चाहिए, जिसमें शामिल हैं:

पीएच समायोजन, अगर गहराई और थाइमिन की पर्याप्त एकाग्रता, थाइमिडीन, सीए⁺⁺, मिलीग्राम⁺⁺ और Zn⁺⁺.

हमें यह भी पता होना चाहिए कि कार्यप्रणाली मानकीकृत है और इसलिए सभी मापदंडों को पूरा किया जाना चाहिए, जैसे:

इनोकुलम की एकाग्रता, एंटीबायोटिक डिस्क की एकाग्रता और संरक्षण, अगर पर डिस्क की उचित संख्या की नियुक्ति, एक डिस्क और दूसरे के बीच की दूरी, कुछ एंटीबायोटिक दवाओं के रणनीतिक प्लेसमेंट, वातावरण, तापमान और डिस्क का समय ऊष्मायन.

तैयारी

निर्जलित म्यूलर हिंटन माध्यम के 37 ग्राम वजन और आसुत जल के 1 लीटर में भंग। इसे भंग करने में मदद करने के लिए सरगर्मी करते हुए मध्यम गरम करें। 1 मिनट के लिए उबलने दें.

15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर बाँझ आटोक्लेव ले लो। आटोक्लेव से हटाते समय, फिला को ठंडा करने के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखा जाना चाहिए। 25 से 30 मिलीलीटर बाँझ पेट्री डिश में 10 सेमी व्यास में डालो.

3-5 मिमी की अनुमति के साथ प्लेटों की औसत मोटाई 4 मिमी (आदर्श) होनी चाहिए.

यदि म्यूलर हिंटन अगार बेस का उपयोग करके रक्त एगर तैयार करने के लिए वांछित है, तो प्लेटों पर सेवा करने से पहले 5% बाँझ और डिफाइब्रेटेड लैम्ब रक्त डाला जाता है।.

मध्यम का अंतिम पीएच 7.2 से 7.4 के बीच होना चाहिए.

एक रेफ्रिजरेटर में निवेश करें और स्टोर करें, जब तक कि उपयोग न करें। उपयोग करने से पहले प्लेट को कमरे का तापमान लेने दें.

तैयार माध्यम का रंग हल्का बेज है.

अनुप्रयोगों

इसका उपयोग ज्यादातर गैर-तेजी से बढ़ते रोगजनकों के लिए एंटीबायोग्राम या एंटीबायोटिक संवेदनशीलता परीक्षण करने के लिए किया जाता है.

यदि अग्र को रक्त से पूरित किया जाता है, तो यह सूक्ष्मजीवों की मांग के एंटीबायोग्राम को निष्पादित करने का कार्य करता है जैसे: स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया, हीमोफिलस एसपी, निसेरिया मेनिंगिटिडिस, दूसरों के बीच में। इसे अलग करने के लिए भी इस्तेमाल किया गया है लीजियोनेला न्यूमोफिला.

एंटीबायोग्राम तकनीक

एंटीबायोग्राम करने से पहले, 1.5 x 10 के बराबर एक जीवाणु समाधान तैयार किया जाना चाहिए⁸ सेल.

ऐसा करने के लिए, 3 से 4 कॉलोनियों को शुद्ध संस्कृति से लिया जाता है और एक ट्राइसेप्स सोया शोरबा में या मुलर हिल्टन शोरबा में निलंबित कर दिया जाता है, 2 से 6 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है और एकाग्रता को बाँझ खारा के साथ समायोजित किया जाता है, इसकी तुलना मैक फ़ारलैंड मानक से की जाती है। 0.5%.

यदि वे सूक्ष्मजीवों की मांग कर रहे हैं, तो कॉलोनियों को सीधे मैक मैकलैंड के 0.5% तक पहुंचने तक निलंबित किया जा सकता है। इसके बाद, म्यूलर हिंटन प्लेट को तैयार किए गए जीवाणु समाधान के साथ संसेचन के साथ बोया जाता है.

ऐसा करने के लिए, समाधान में झाड़ू को डुबोएं और फिर ट्यूब की दीवारों के खिलाफ दबाकर अतिरिक्त तरल निकालें। स्वाब पूरी सतह पर पारित होने के तुरंत बाद, कोई अछूता साइट नहीं छोड़ता है, फिर प्लेट को थोड़ा घुमाएं और फिर से बोएं। ऑपरेशन को 2 बार दोहराया जाता है.

10 मिनट के लिए खड़े रहने दें और फिर एक बाँझ संदंश के साथ एंटीबायोटिक डिस्क रखें, जिससे उनके बीच 24 मिमी का स्थान हो। अगर में प्रत्येक डिस्क रखने के बाद क्लैंप के साथ हल्के से प्रत्येक को दबाएं ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि वे अच्छी तरह से पालन कर रहे हैं.

प्रक्रिया के बाद, प्लेट को उल्टा किया जाता है और 16 से 18 घंटे के लिए एरोबायोसिस में 35-37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है। यदि यह एक मांग वाला सूक्ष्मजीव है, तो उसे माइक्रोएरोफिलिया की आवश्यकता हो सकती है और यदि एंटीबायोग्राम में ऑक्सासिलिन डिस्क हो तो उसे 24 घंटे में पढ़ा जाना चाहिए.

प्रत्येक प्रभामंडल के व्यास को मापने के लिए एक शासक का उपयोग किया जाता है। परिणाम मिमी में दर्ज किए जाने चाहिए। इसके बाद, प्राप्त मूल्यों को वर्तमान सीएलएसआई मैनुअल द्वारा प्रकाशित कट पॉइंट्स की तालिकाओं के साथ सहसंबद्ध किया जाता है.

संवेदनशील (एस), मध्यवर्ती (आई), या प्रतिरोधी (आर) के रूप में रिपोर्ट करें, जैसा कि मामला हो सकता है.

एंटीबायोटिक्स को पृथक सूक्ष्मजीव और संक्रमण के प्रकार के अनुसार चुना जाता है.

कभी-कभी एंटीबायोटिक दवाओं के रणनीतिक स्थान को फेनोटाइपिक प्रतिरोध पैटर्न दिखाने के लिए माना जाना चाहिए.

म्यूलर हिंटन आगर पर डिस्कशन का रणनीतिक प्लेसमेंट

एंटरोबैक्टीरिया के लिए, क्लैवुलैनिक एसिड डिस्क को तीसरी और चौथी पीढ़ी के सेफलोस्पोरिन के सामने रखा जाना चाहिए। अंडे के आकार का चौड़ा होना यह दर्शाता है कि स्ट्रेन विस्तारित-स्पेक्ट्रम बीटा-लैक्टामेस (ईएसबीएल) का उत्पादक है। इसका मतलब है कि रोगी को किसी भी सेफलोस्पोरिन के साथ इलाज नहीं किया जाना चाहिए.

स्टैफिलोकोकस में एरिथ्रोमाइसिन या एजिथ्रोमाइसिन डिस्क को क्लिंडामाइसिन डिस्क (डी-टेस्ट) के सामने रखना महत्वपूर्ण है.

एरिथ्रोमाइसिन में एक प्रतिरोधी प्रभामंडल और क्लिंडामाइसिन प्रभामंडल में एक चपटा इंगित करता है कि तनाव में क्लिंडामाइसिन, तनाव (आरआईसी) के लिए एक प्रेरक प्रतिरोध है। इसका मतलब है कि क्लिंडामाइसिन के साथ एक उपचार प्रभावी नहीं होगा.

एंटरोबैक्टीरिया और कुछ गैर-किण्वन ग्राम नकारात्मक बेसिली में अमुद्र एएमपी सी उपभेदों की खोज के लिए, 27 मिमी की दूरी पर, एक इनीफेनीम डिस्क के साथ सीफैटजाइम, सेफोक्सिटिन या पिपेरेसिलिन टाज़ोबासन के डिस्क का सामना किया जाता है।.

इमीपीनम का सामना करने वाली डिस्क में से एक में एक प्रभामंडल दिखाई देता है जो कि इंड्यूसेबल एएमपी सी की उपस्थिति को दर्शाता है.

संवैधानिक AMP C की खोज के लिए, एक cloxacillin 500 μg डिस्क का सामना Ceftazidime (30 μg) के साथ और cefotaxime (30 μg) के साथ 25 मिमी की दूरी पर किया जाता है। सेफलोस्पोरिन में से एक में एक चौड़ा प्रभामंडल सकारात्मकता को इंगित करता है.

Cloxacillin डिस्क को 18 mm की दूरी के साथ फेनिल बोरोनिक एसिड (400 μg) के साथ इंप्रूव्ड व्हाटमैन नंबर 6 फिल्टर पेपर के 9 मिमी डिस्क से भी बदला जा सकता है। इसकी व्याख्या पहले जैसी है.

अंत में, विशेष रूप से धातु-बीटा-लैक्टामेस के उत्पादन की जांच करने के लिए स्यूडोमोनास एरुगिनोसा, एथिलीनिडामिनाईटेटासैटिक एसिड (EDTA 750 μg) और थायोग्लाइकोलिक एसिड (SMA 300 μg) के 10 μl के साथ गर्भवती डिस्क, जो 15 मिमी की दूरी पर प्रयोग किया जाता है, जो इमीपेनम और मेरोपेनेम डिस्क का सामना करता है।.

यदि EDTA / SMA डिस्क की ओर imipenem या meropenem halos का चौड़ीकरण है, तो परीक्षण सकारात्मक है। इस परिणाम की पुष्टि संशोधित हॉज परीक्षण द्वारा की जानी चाहिए.

इस विधि में एक तनाव का टीका लगाना शामिल है एस्केरिचिया कोलाई Müeller Hinton प्लेट पर ATCC 25922। एक एपिनेम डिस्क को प्लेट के केंद्र में रखा जाता है और फिर डिस्क से एक बांसुरी बनाई जाती है, जिसमें खिंचाव के साथ परिधि की ओर डिस्क होती है। पी। एरुगिनोसा संदिग्ध। आप प्रति प्लेट 4 उपभेदों का परीक्षण कर सकते हैं.

टेस्ट सकारात्मक होगा यदि स्ट्रिप के चारों ओर इमिपेनेम हेलो का विरूपण क्षेत्र है.

गलत परिणामों के कारण

-खराब संरक्षित एंटीबायोटिक दवाओं के डिस्क झूठे प्रतिरोध पैदा कर सकते हैं। उदाहरण के लिए, ऑक्सासिलिन डिस्क तापमान परिवर्तन के लिए बहुत कमजोर है.

-नीचे दिए गए माध्यम का एक पीएच जो इंगित करता है (एसिड) अमीनोग्लाइकोसाइड और मैक्रोलाइड्स (झूठे प्रतिरोध का खतरा) में छोटे प्रभामंडल पैदा करता है, और पेनिसिलिन, टेट्रासाइक्लिन और नोवोबोसिन (झूठी संवेदनशीलता का खतरा) में बड़े प्रभामंडल होते हैं।.

-यदि पीएच संकेतित (क्षारीय) से ऊपर है, तो ऊपर वर्णित प्रभाव उलट हैं.

-उच्च थाइमिन और थाइमिडाइन सांद्रता वाले मीडिया सल्फोनामाइड्स और ट्राइमेथ्रोप्रिम के अवरोधक प्रभारों को कम करने में काफी प्रभावित करते हैं.

-कैल्शियम और मैग्नीशियम की उच्च सांद्रता अमीनोग्लाइकोसाइड्स, पॉलीमीक्सिन बी और टेट्रासाइक्लिन के झूठे प्रतिरोध का उत्पादन करती हैं स्यूडोमोनास एरुगिनोसा.

-कैल्शियम और मैग्नीशियम की कम सांद्रता अमीनोग्लाइकोसाइड्स, पॉलीमीक्सिन बी और टेट्रासाइक्लिन की झूठी संवेदनशीलता का उत्पादन उपभेदों के खिलाफ करती है स्यूडोमोनास एरुगिनोसा.

-जिंक की उपस्थिति कार्बापेनियम डिस्क्स के परिणामों को प्रभावित करती है (इमिपेनम, मेरोपेनेम और ertapenem).

-3 मिमी से नीचे के माध्यम की मोटाई झूठी संवेदनशीलता परिणाम पैदा करती है, जबकि 5 से ऊपर की मोटाई झूठी प्रतिरोध का उत्पादन करेगी.

-एंटीबायोटिक में डिस्क का जमाव विकृत रूप देगा, क्योंकि एंटीबायोटिक डिस्चार्ज तत्काल होता है.

- बहुत कमजोर इनोकुलम परिणामों को प्रभावित करते हैं, क्योंकि अगरबत्ती में कोई समान या संगम वृद्धि नहीं होगी, इस तथ्य के अतिरिक्त कि अवरोधक क्षेत्रों को मापने में सक्षम होने के लिए एक आवश्यक शर्त है, जो प्रभामंडल सामान्य से बड़ा दे सकता है.

-अतिभारित इनोकुला हेलो को सामान्य से छोटा दे सकता है.

-डिस्क के बीच की दूरी का सम्मान नहीं करना एक प्रभामंडल का कारण बनता है दूसरे को ओवरलैप करना और सही ढंग से पढ़ा नहीं जा सकता.

-सीओ के साथ सेते हैं₂ टेट्रासाइक्लिन और मेथिसिलिन डिस्क के प्रकटीकरण का आकार बढ़ाता है.

-35 डिग्री सेल्सियस से नीचे के तापमान पर ऊष्मायन बड़े प्रभामंडल पैदा करता है.

-रक्त के जुड़ने से सल्फोनामाइड्स के प्रभामंडल का आकार घट जाता है.

सीमा

एक एंटीबायोटिक की संवेदनशीलता एक सूक्ष्मजीव के खिलाफ एंटीबायोग्राम में प्रदर्शित होती है (इन विट्रो में) गारंटी नहीं है कि यह काम करेगा विवो में.

गुणवत्ता नियंत्रण

यह जानने के लिए कि क्या माध्यम में थाइमिन की सही मात्रा है, एक तनाव बोया जाना चाहिए एंटरोकॉकस फेसेलिस का ATCC 29212 और ट्राइमेथोप्रिम सल्फेमेथाज़ोल (SXT) के लिए संवेदनशीलता की जांच करें, यह एक हेलो के बराबर या> 20 मिमी संतोषजनक होना चाहिए.

संदर्भ

1. "आगर मुलर-हिंटन।" विकिपीडिया, मुक्त विश्वकोश. 16 नवंबर 2018, 12:23 यूटीसी। 27 जनवरी, 2019, 04:22
2. फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए (2009)। बेली एंड स्कॉट का माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 12 एड। संपादकीय पानामेरिकाना एस.ए. अर्जेंटीना.
3. Cona E. Agar प्रसार प्रसार परीक्षण द्वारा एक अच्छी संवेदनशीलता के अध्ययन के लिए शर्तें. रेव इनफेक्ट, 2002; 19 (2): 77-81
4. डीम्को फ्रांसिस्को सोरिया मेलगुइज़ो प्रयोगशाला। 5% भेड़ के खून से म्यूलर हिंटन अगर। 2009. पर उपलब्ध: http://f-soria.es
5. बीडी मुलर हिंटन II आगर प्रयोगशाला। 2017. पर उपलब्ध: .bd.com
6. प्रयोगशालाओं ब्रिटानिया। म्यूलर हिंटन आगर। 2015 में उपलब्ध: britanialab.com
7. कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एस.ए. अर्जेंटीना.
8. Martínez-Rojas D. Betalactamasas प्रकार AmpC: फेनोटाइपिक पहचान के लिए सामान्य और तरीके. रेव। सुक। वेन। Microbiol. 2009; 29 (2): 78-83। पर उपलब्ध: scielo.org.
9. पेरोज़ो ए, कैस्टेलानो एम, लिंग ई, अराइज़ एन। क्लिनिकल आइसोलेट्स में मेटालोबैटेक्टेक्टामेस के फेनोटाइपिक डिटेक्शन स्यूडोमोनास एरुगिनोसा. Kasmera, 2012; 40 (2): 113-121। पर उपलब्ध: scielo.org.