Agar M.R.S नींव, तैयारी और उपयोग

आगर एम। आर। एस. एक चयनात्मक ठोस संस्कृति माध्यम है, जो लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के अलगाव और गिनती के लिए उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से जीनस लैक्टोबैसिलस के। इस आगर को 1960 में मैन, रोगोसा और शार्प द्वारा बनाया गया था, जो मध्य में एक ही नाम का है, लेकिन इसकी जटिलता के कारण इसका संक्षिप्त नाम M.R.S है।.

यह प्रोटेक्टोस पेप्टोन, मीट एक्सट्रैक्ट, यीस्ट एक्सट्रैक्ट, ग्लूकोज, सोर्बिटोन मोनोलिएट, डिपोटेशियम फॉस्फेट, सोडियम एसीटेट, अमोनियम साइट्रेट, मैग्नीशियम सल्फेट, मैंगनीज सल्फेट और अगर से बना है।.

यह संरचना नैदानिक ​​नमूनों, जैसे कि मल, योनि स्राव, मौखिक नमूनों और स्तन के दूध के साथ-साथ डेयरी और मांस खाद्य पदार्थों से लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के समुचित विकास की अनुमति देती है।.

यह नैदानिक ​​प्रयोगशालाओं में नियमित रूप से उपयोग नहीं किया जाता है, क्योंकि लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया शायद ही कभी रोग प्रक्रियाओं में शामिल होते हैं। हालांकि, खाद्य सूक्ष्म जीव विज्ञान के क्षेत्र में एमआरएस अगार का उपयोग अधिक बार होता है।.

दूसरी ओर, इस माध्यम का उपयोग कुछ अनुसंधान केंद्रों द्वारा किया जाता है, जिनका उद्देश्य लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अध्ययन है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 तैयारी
• ३ उपयोग
  • 3.1 उपनिवेशों की विशेषताएँ
  • 3.2 लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अलगाव
  • 3.3 लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती
  • ३.४ अनुसंधान स्तर पर
• 4 गुणवत्ता नियंत्रण
• 5 संदर्भ

आधार

आगर मैन, रोगोसा और शार्प की काफी जटिल रचना है। प्रत्येक घटक को पूरा करने वाले फ़ंक्शन को तोड़कर, इसकी नींव को समझाया जा सकता है.

प्रोटीन पेप्टोन, मांस का अर्क, खमीर निकालने और ग्लूकोज ऐसे पोषक तत्व हैं जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक कार्बन, नाइट्रोजन, विटामिन और खनिजों का स्रोत प्रदान करते हैं। इसके अलावा, ग्लूकोज सार्वभौमिक ऊर्जा स्रोत है जिसका उपयोग अधिकांश संस्कृति मीडिया में किया जाता है.

दूसरी ओर, लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया के विकास के पक्ष में, लैक्टोबैसिलस और संबंधित बैक्टीरिया के चयापचय में अपरिहार्य कोफ़ेक्टर्स (उद्धरण) की उपस्थिति आवश्यक है; ये यौगिक सोडियम, मैग्नीशियम और मैंगनीज लवण हैं.

इसी तरह, सोर्बिटान मोनोलिएट या पॉलीसॉर्बेट 80 महत्वपूर्ण फैटी एसिड का स्रोत होते हैं जब पोषक तत्वों के रूप में अवशोषित होते हैं.

इसके अलावा, सोर्बिटान मोनोलिएट और अमोनियम साइट्रेट, साथ-साथ वनस्पतियों के विकास को रोककर, विशेष रूप से ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया, इस अगर के चुनिंदा चरित्र को प्रदान करते हैं.

अंत में, अगर-अगर यह माध्यम को ठोस स्थिरता देता है.

मैन रोगोसा शार्प अगर के अन्य रूप हैं; उनमें से एक सिस्टीन (M.R.S.c) के साथ पूरक है, अन्य सूक्ष्मजीवों के बीच बिफीडोबैक्टीरिया के अलगाव के लिए बहुत उपयोगी है। दूसरी ओर, विशेष रूप से डेयरी उत्पादों में बिफीडोबैक्टीरिया की चयनात्मक गिनती के लिए, विशेष रूप से नोमाइसिन, पेरोमोमाइसिन, नेलेडिक्लिक एसिड और लिथियम क्लोराइड के साथ पूरक एमआरएस माध्यम है।.

तैयारी

निर्जलित माध्यम का 68.25 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। 5 मिनट तक खड़े रहने दें। इसकी संपूर्णता में घुलने के लिए, गर्मी के स्रोत को बार-बार हिलाएं और 1 से 2 मिनट तक उबलने दें। 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ.

आटोक्लेव छोड़ते समय कुछ मिनट खड़े रहने दें और बाँझ पेट्री डिश में अभी भी गर्म वितरित करें.

प्लेटों को जमने और पलटने की अनुमति दें, उपयोग करने तक रेफ्रिजरेटर में प्लैक और स्टोर करें। प्लेटों को उपयोग करने से पहले कमरे का तापमान लेने दें.

माध्यम का पीएच 6.4। 0.2 होना चाहिए। कुछ वाणिज्यिक घर 5.5 से 5.9 के बीच पीएच की सलाह देते हैं.

निर्जलित माध्यम बेज है और तैयार अंधेरा एम्बर है.

निर्जलित माध्यम और तैयार प्लेट दोनों को 2 से 8 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहित किया जाना चाहिए.

अनुप्रयोगों

आगर प्लेटें एम.आर.एस. उन्हें सतह पर (थकावट या ड्रिग्ल्स्की के एक स्पैटुला के साथ) बोया जा सकता है। इसे गहराई से भी बोया जा सकता है। प्लेट्स को माइक्रोएरोफिलिक (4% ओ) में 37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाना चाहिए₂ और सीओ का 5-10%₂) 24 से 72 घंटे तक.

बोने की विधि का पालन उद्देश्य के अनुसार चुना जाता है (अलगाव या गिनती).

उपनिवेशों की विशेषताएँ

लैक्टोबैसिलस के प्रकल्पित उपनिवेश सफेद होते हैं और इस आगर पर एक श्लेष्म या मलाईदार उपस्थिति होती है। फिर उन्हें पहचानना होगा.

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अलगाव

इस उद्देश्य के लिए, सतह द्वारा रोपण का उपयोग किया जाता है। लगाए जाने वाले नमूनों को पिछली प्रक्रिया की आवश्यकता होती है. 

स्तन के दूध के नमूने के मामले में, फैटी परत को हटाने के लिए 10 मिनट के लिए 14,000 आरपीएम पर नमूने के 1 मिलीलीटर को अपकेंद्रित्र करने की सिफारिश की जाती है। 900 μl को छोड़ दिया जाता है, और शेष 100 μl में तलछट को निलंबित कर दिया जाता है और M.R.S पर डाला जाता है। फिर इसे Drigalski के एक रंग के साथ समान रूप से वितरित किया जाना चाहिए.

मल के नमूनों के मामले में, 1 (1) ग्राम मल को तौला जाता है और एक 1/10 कमजोर पड़ने के लिए 0.1% बाँझ पेप्टोनेटेड पानी के 9 एमएल में समरूप किया जाता है। तब तक धारावाहिक पतला किया जाता है, जब तक कि 10 का अंतिम कमजोर पड़ना प्राप्त नहीं हो जाता^-4.

अंत में, dilutions 10 के 100 μl लिया जाता है^-2, 10^-3 और 10^-4 और प्रत्येक कमजोर पड़ने को MRS agar पर रखा जाता है, एक Drigalski स्पैटुला के साथ समान रूप से वितरित करता है.

लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की गिनती

इस मामले में बोने की गहराई से किया जाता है.

स्तन के दूध के नमूनों के लिए, 1 एमएल लें और इसे बाँझ शंक्वाकार प्लास्टिक ट्यूब में रखें। एक समरूप मिश्रण प्राप्त करते हुए, एमआरएस अगर को लगभग 40 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 25 एमएल के अंतिम मात्रा में जोड़ा जाता है। इसके बाद, इसे एक समान तरीके से बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है और इसे पॉलीमराइज़ करने तक खड़े होने की अनुमति दी जाती है।.

जैसा कि ऊपर वर्णित है, मल के नमूनों के लिए पतला किया जाता है। बाँझ शंक्वाकार प्लास्टिक ट्यूबों में प्रत्येक कमजोर पड़ने और जगह के 1 एमएल लें। पिघला हुआ एमआरएस अगर 25 एमएल की मात्रा में मिलाया जाता है.

प्रत्येक कमजोर पड़ने का मिश्रण समान रूप से बाँझ पेट्री डिश में डाला जाता है। अंत में इसे अपने पोलीमराइजेशन तक खड़े रहने दें.

अनुसंधान स्तर पर

हर दिन लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का अध्ययन अधिक दिलचस्प हो जाता है; विशेष रूप से शोधकर्ताओं ने अन्य उपयोगों के साथ डेयरी उत्पादों के निर्माण में मानकीकरण के लिए किण्वन की शुरुआत के रूप में नई उपभेदों और उनकी क्षमता को जानना चाहा है.

इस अर्थ में, अल्वाराडो एट अल। (2007) ने एम। आर। एस। अग्र का उपयोग किया। एक अध्ययन को अंजाम देने के लिए जिसमें उन्होंने एक कारीगर स्मोक्ड वेनेजुएला पनीर में मौजूद लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया को अलग, पहचान और विशेषता दी.

पनीर में उन्होंने जेनेरा लैक्टोकोकस और लैक्टोबैसिलस के जीवाणुओं की उपस्थिति को पाया, और निष्कर्ष निकाला कि अलग-अलग उपभेदों का मिश्रण पास्चुरीकृत दूध से चीज के निर्माण में स्टार्टर स्ट्रेन के रूप में उपयुक्त है।.

दूसरी ओर, सैंचेज़ एट अल। (2017) में एम। आर। एस। स्वस्थ पिगलेट की उत्पादकता बढ़ाने वाले देशी प्रोबायोटिक्स के रूप में उपयोग करने के लिए पिगलेट के पाचन तंत्र में लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की उपस्थिति की जांच करना.

इस माध्यम से वे चार प्रजातियों को अलग करने में कामयाब रहे: लैक्टोबैसिलस जॉनसन, लैक्टोबैसिलस ब्रेविस, एंटरोकोकस हिरे और पेडियोकोकस पेंटोसैसस.

इसी तरह, बाज एट अल। (2019) में एम। आर। एस। अग्र का उपयोग किया गया। स्तन के दूध में प्रोबायोटिक क्षमता और शिशुओं के मल के साथ लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया (BAL) और बिफीडोबैक्टीरिया का मूल्यांकन करना.

वे 11 बाल और 3 को अलग करने में कामयाब रहे बिफिडोबैक्टीरिया सपा स्तन के दूध में, और 8 बाल और 2 बिफिडोबैक्टीरिया सपा. मल में सभी कुछ निश्चित मापदंडों को पूरा करते हैं जो उन्हें प्रोबायोटिक गतिविधि वाले बैक्टीरिया के रूप में मान्यता देते हैं.

लेखकों ने निष्कर्ष निकाला कि स्तन के दूध और विशेष रूप से स्तनपान करने वाले शिशुओं के मल दोनों प्रोबायोटिक बैक्टीरिया के प्राकृतिक स्रोतों के रूप में काम करते हैं.

गुणवत्ता नियंत्रण

की गुणवत्ता का मूल्यांकन करने के लिए एम.आर.एस. नियंत्रण उपभेदों जैसे इस्तेमाल किया जा सकता है:

लैक्टोबैसिलस किण्वक एटीसीसी 9338, लैक्टोबैसिलस केसी एटीसीसी 393, बिफीडोबैक्टीरियम बिफिडम एटीसीसी 11863, लैक्टोबैसिलस प्लांटरम एमकेटीए 8014, लैक्टोबैसिलस लैक्टिस एमकेटीए 19435, पेडियोकोकस डेमनोसस एमकेटीए 29358, एस्केरिचिया कोलाई और बेसिलस सेरेस.

अपेक्षित परिणाम पहले 6 बैक्टीरिया के लिए संतोषजनक वृद्धि है, जबकि ई। कोलाई और बैसिलस सेरेस इसकी संपूर्णता में अवरोध होना चाहिए.

संदर्भ

1. अल्वाराडो सी, चाकोन जेड, ओटोनियल जे, गुएरेरो बी, लोपेज़ जी अलगाव, एक रेडियन स्मोक्ड स्मोक्ड वेनेजुएलान चीज़ से लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया की पहचान और विशेषता। स्टार्टर कल्टिवेशन के रूप में इसका उपयोग। Cient। (मारकाइबो) 2007; 17 (3): 301-308। पर उपलब्ध: scielo.org.
2. सेंजेज़ एच, फैबियान एफ, ओचोआ जी, अल्जेरो आइसोलिएशन ऑफ लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया पिगलेट के डाइजेस्टिव ट्रैक्ट से। जाँच करें। पशु चिकित्सक। पेरू 2017; 28 (3): 730-736। पर उपलब्ध: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. लैक्टिक एसिड बैक्टीरिया का मूल्यांकन और Bifidobacteria स्तन के दूध में प्रोबायोटिक क्षमता और Acevedo, Miranda 2017 के नगर पालिका में शिशुओं के मल के साथ। स्नातक की डिग्री प्राप्त करने के लिए स्नातक की डिग्री प्राप्त करने के लिए स्नातक कार्य। bioassays। यूनिवर्सिटी ऑफ काराबोबो, वेनेजुएला.
4. ब्रिटिश प्रयोगशाला M.R.S अगार। 2015 में उपलब्ध: britanialab.com
5. विकिपीडिया योगदानकर्ता। एमआरएस अगर विकिपीडिया, मुक्त विश्वकोश। 10 जनवरी, 2018, 19:44 यूटीसी। पर उपलब्ध है: wikipedia.org 17 फरवरी, 2019 तक पहुँचा.
6. डेयरी उत्पादों में बिफीडोबैक्टीरिया के अलगाव और गणना के लिए रॉय डी। मीडिया. इंट जे फूड माइक्रोबॉयल, 200,128; 69 (3): 167-82.