आगर एलआईए (लाइसिन आयरन) नींव, तैयारी और उपयोग

LIA अगर (लाइसिन आयरन) एक जैव रासायनिक परीक्षण है जिसका उपयोग परिवार एंटरोबैक्टीरिया के बैक्टीरिया की पहचान करने के लिए किया जाता है। यह माध्यम फॉकवे के फॉर्मूले के आधार पर एडवर्ड्स और मुरली द्वारा बनाया गया था.

मूल रूप से यह परीक्षण पेप्टोन, खमीर निकालने, ग्लूकोज, एल-लाइसिन, ब्रोमोकेरसोल बैंगनी और आसुत जल युक्त शोरबा था। एडवर्ड्स और मुरली ने अगर-अगर, फेरिक अमोनियम साइट्रेट और सोडियम थायोसल्फेट को जोड़ा.

परीक्षण में मूल रूप से एंजाइम लाइसिन डीकार्बाक्सिलेज की उपस्थिति का प्रदर्शन होता है, जो एमिनो एसिड एल-लाइसिन के कार्बोक्सिल समूह के साथ प्रतिक्रिया करने में सक्षम होता है। अमीनो एसिड का एक विघटन भी एंजाइम लाइसिन डेमिनमिनस की उपस्थिति के कारण हो सकता है.

इसके अतिरिक्त, माध्यम की संरचना हाइड्रोजन सल्फाइड के उत्पादन के लिए कुछ जीवाणु जनन की क्षमता को प्रदर्शित करने की अनुमति देती है। अंत में, बीच में गैस का उत्पादन या नहीं करना भी संभव है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 पेप्टोन और खमीर निकालने
  • 1.2 ग्लूकोज
  • 1.3 एल-लाइसिन
  • 1.4 पीएच संकेतक (ब्रोमोकेरसोल बैंगनी)
  • 1.5 अमोनियम फेरिक साइट्रेट और सोडियम थायोसल्फेट
• 2 परीक्षण की व्याख्या
  • 2.1 लाइसिन की डिकार्बोक्सिलेशन
  • २.२ लिसेन का विघटन
  • 2.3 हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन (H2S)
• 3 परिणामों का रिकॉर्ड
• 4 तैयारी
• 5 का उपयोग करता है
• 6 संदर्भ

आधार

पेप्टोन और खमीर निकालने

अधिकांश संस्कृति मीडिया की तरह, लोहे के लाइसिन अगर में ऐसे घटक होते हैं जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्वों का स्रोत प्रदान करते हैं। इन घटकों को पेप्टोन और खमीर निकालने द्वारा दर्शाया गया है.

शर्करा

इसके अलावा, इस अगरर में किण्वित कार्बोहाइड्रेट ग्लूकोज होता है। यह ज्ञात है कि परिवार के सभी बैक्टीरिया Enterobacteriaceae किण्वन ग्लूकोज.

यह कदम महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह माध्यम को अम्लीकृत करने के लिए जिम्मेदार होगा, एंजाइम लिसिन डिकार्बोसाइलेज़ के लिए एक आवश्यक स्थिति, यदि मौजूद है, तो इसके सब्सट्रेट पर कार्य करने के लिए.

कुछ बैक्टीरियल जेनेरा में, ग्लूकोज के किण्वन के कारण होने वाले गैस उत्पादन को देखा जा सकता है.

ट्यूब में अगर का विस्थापन होने पर, गैस का निष्कासन होता है, ट्यूब के नीचे खाली जगह छोड़ देता है, या दो या दो से अधिक भागों में माध्यम को फ्रैक्चर करके.

एल लाइसिन

एक बार लाइसिन डीकारोक्सिलेटेड होने के बाद, एक डायमाइन (कैडेवरिन) और कार्बन डाइऑक्साइड बनता है.

Decarboxylation कोएंजाइम पाइरिडोक्सल फॉस्फेट की उपस्थिति में होता है। यह प्रतिक्रिया अपरिवर्तनीय है.

PH संकेतक (ब्रोमोकेरसोल बैंगनी)

विभिन्न प्रतिक्रियाओं द्वारा माध्यम में होने वाले पीएच के सभी परिवर्तनों का पता ब्रोमोकेरसोल बैंगनी पीएच संकेतक द्वारा लगाया जाता है.

इस अर्थ में, जब अम्लीकरण होता है तो माध्यम पीला हो जाता है, और जब क्षारीकरण होता है तो माध्यम मूल बैंगनी या बैंगनी रंग में लौटता है.

जब लाइसिन का क्षय एंजाइम लाइसिन डेमिनमिन की उपस्थिति से होता है, सतह पर एक लाल रंग का रूप, सामान्य प्रोटीन, प्रोविडेंसिया और मॉर्गनैला की कुछ प्रजातियों में विशिष्ट होता है.

यह इस तथ्य के कारण है कि डेमिनेशन की प्रक्रिया के दौरान अल्फा-कीटो-कार्बोनिक एसिड बनता है, जो ऑक्सीजन की उपस्थिति में अमोनियम साइट्रेट के साथ प्रतिक्रिया करता है, जो उपरोक्त रंग का कारण बनता है.

अमोनियम फेरिक साइट्रेट और सोडियम थायोसल्फेट

दूसरी ओर, हाइड्रोजन सल्फाइड पैदा करने वाले बैक्टीरिया सोडियम थायोसल्फेट (सल्फर के स्रोत) और फेरिक अमोनियम साइट्रेट की उपस्थिति से निकाले जाएंगे, जो एच के डेवलपर हैं₂एस.

थायोसल्फेट रिडक्टेज एंजाइम वाले बैक्टीरिया में मौजूद सोडियम थायोसल्फेट को कम करके सल्फाइट और हाइड्रोजन सल्फाइड (एच) बनाने की क्षमता होती है।₂एस).

उत्तरार्द्ध एक रंगहीन गैस है, लेकिन जब यह लोहे के नमक के साथ प्रतिक्रिया करता है तो धातु का लौह सल्फाइड बनता है, जो एक अघुलनशील यौगिक (दृश्यमान काला अवक्षेप) है.

हालांकि, एच गठन की क्षमता₂इस माध्यम के साथ एस बहुत विश्वसनीय नहीं है, क्योंकि कुछ नकारात्मक लाइसिन डीकार्बाक्सिलेज बैक्टीरिया एच उत्पादन में सक्षम हैं₂S काले अवक्षेप का निर्माण नहीं करेगा, क्योंकि माध्यम की अम्लता हस्तक्षेप करती है। इसलिए अन्य साधनों के साथ जांच करने की सिफारिश की जाती है जिनमें लोहा होता है.

परीक्षण की व्याख्या

लाइसिन का डिकार्बोक्साइलेशन

ऊष्मायन के 24 घंटों के अंत के बाद ट्यूबों को पढ़ा जाना चाहिए, अन्यथा प्रतिक्रिया की गलत व्याख्या करने, गलत लक्षणों की रिपोर्ट करने का जोखिम है.

यह याद रखना चाहिए कि पहली प्रतिक्रिया जो ग्लूकोज का किण्वन होगी, इसलिए 10 से 12 के बाद सभी नलिकाएं पीले रंग की हो जाएंगी.

यदि ऊष्मायन अवधि (24 घंटे) के अंत में एक बैंगनी या बैंगनी सतह के साथ एक पीले रंग की पृष्ठभूमि देखी जाती है, तो प्रतिक्रिया नकारात्मक है। सतह का बैंगनी रंग पेप्टोन के उपयोग द्वारा माध्यम के क्षारीकरण से मेल खाता है.

एक सकारात्मक प्रतिक्रिया वह है जिसमें नीचे और ट्यूब की सतह पूरी तरह से बैंगनी होती है, अर्थात यह मूल रंग में लौट आती है.

इसलिए, जो निर्धारित करता है कि परीक्षण की सकारात्मकता माध्यम का आधार या तल है। यदि आपको रंग के बारे में संदेह है, तो आप इसकी तुलना एक गैर-टीकाकृत एलआईए ट्यूब के साथ कर सकते हैं.

लाइसिन का वमन

एक ट्यूब जो लाइसिन के प्रसार को दर्शाती है, उसमें एक लाल-भूरे रंग की सतह और एक पीले रंग की पृष्ठभूमि (एसिड), या पूरे लाल-भूरे रंग की ट्यूब होगी।.

इस प्रतिक्रिया को लाइसिन के डिकार्बोजाइलेशन के लिए नकारात्मक के रूप में व्याख्या की जाती है, लेकिन लाइसिन के प्रसार के लिए सकारात्मक है.

इस प्रतिक्रिया को बेवेल में परिभाषित और व्याख्यायित किया जाता है.

हाइड्रोजन सल्फाइड (एच) का उत्पादन₂एस)

माध्यम के सभी या हिस्से में एक काले अवक्षेप के रूप में एक सकारात्मक प्रतिक्रिया देखी जाती है। आम तौर पर बेवल सीमा और बेस के बीच.

यदि वेग पूरे ट्यूब में होता है, तो यह माध्यम में होने वाली अन्य प्रतिक्रियाओं को नहीं दिखाएगा.

परिणामों का रिकॉर्ड

परीक्षण की व्याख्या करते समय परिणाम निम्नानुसार दर्ज किए जाते हैं:

पहले बेवल पढ़ें, फिर नीचे या टैको, फिर एच का उत्पादन₂एस, और अंत में गैस उत्पादन.

उदाहरण: के / ए + (-)। इसका मतलब है:

• K: क्षारीय बेजल (बैंगनी)
• ए: एसिड (पीला) पृष्ठभूमि, अर्थात्, नकारात्मक डिकार्बोलेशन प्रतिक्रिया और नकारात्मक विचलन.
• +: हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्पादन
• (-): गैस के बिना.

तैयारी

लाइसिन अगार निर्जलित लोहे का 35 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग.

जब तक अगर पूरी तरह से भंग न हो जाए, तब तक गरम करें, इसलिए इसे एक मिनट के लिए उबालें। कपास के ढक्कन के साथ 13/100 परीक्षण ट्यूबों में मध्यम के 4 मिलीलीटर वितरित करें.

15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ। आटोक्लेव से निकालें और एक इच्छुक तरीके से आराम करने की अनुमति दें, इस तरह से कि एक गहरा आधार और एक छोटा बेवल हो.

एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें 2-8 डिग्री सेल्सियस। बैक्टीरियल स्ट्रेन को लगाने से पहले संयम रखने की अनुमति दें.

निर्जलित माध्यम का रंग बेज है और मध्यम तैयार लाल बैंगनी रंग है.

तैयार माध्यम का अंतिम पीएच 6.7 pH 0.2 है।

मध्यम पीएच के बराबर पीला या 5.2 से कम, और पीएच 6.5 से ऊपर होता है.

अनुप्रयोगों

यह परीक्षण, अन्य जैव रासायनिक परीक्षणों के साथ मिलकर, परिवार एंटरोबैक्टीरिया से बेसिली की पहचान करने के लिए किया जाता है।.

मध्यम को एक सीधी लूप या सुई के साथ बोया जाता है, एक या दो छिद्र ट्यूब के नीचे किए जाते हैं, और फिर माध्यम की सतह को ज़िगज़ैग किया जाता है.

यह एरोबिओसिस में 35-37 डिग्री सेल्सियस पर 24 घंटे के लिए ऊष्मायन किया जाता है। यदि आवश्यक हो तो इसे 24 घंटे अधिक के लिए छोड़ दिया जाना चाहिए.

यह मुख्य रूप से नकारात्मक Citrobacter lactose प्रजातियों से अंतर करने के लिए उपयोगी है साल्मोनेलस सपा.

संदर्भ

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