Agar EMB नींव, तैयारी और उपयोग

ईएमबी आगर ग्राम नकारात्मक बेसिली के अलगाव के लिए उपयोग किया जाने वाला एक चयनात्मक और अंतर ठोस संस्कृति माध्यम है, मुख्य रूप से एंटरोबैक्टीरिया परिवार और अन्य गैर-मांग वाले ग्राम नकारात्मक बेसिली। इसे परिचित EAM से भी जाना जाता है, जिसका अर्थ है eosin-methylene blue.

यह माध्यम 1916 में होल्ट-हैरिस और टीग द्वारा बनाया गया था। इसमें पेप्टोन, लैक्टोज, सूक्रोज, डिपोटेशियम फॉस्फेट, अगर, ईओसिन, मिथाइलीन ब्लू और पानी शामिल हैं। यह MacConkey agar से काफी मिलता-जुलता है, खासकर अगर लेवी द्वारा संशोधित EMB agar का उपयोग किया जाता है, जिसमें सुक्रोज नहीं होता है.

वास्तव में, प्रत्येक प्रयोगशाला यह तय करती है कि यह एक या दूसरे के साथ काम करता है, क्योंकि वे एक ही कार्य को पूरा करते हैं, हालांकि जैव रासायनिक रूप से वे भिन्न होते हैं.

यहां तक ​​कि यह जीनस प्रोटियस द्वारा झुंड के उत्पादन के मामले में क्लासिक मैककोनी अगर के रूप में एक ही दोष प्रस्तुत करता है। इसलिए, इस घटना से बचने के लिए आप अगर की एकाग्रता को 5% तक बढ़ा सकते हैं.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • १.१ चयनात्मक
  • 1.2 अंतर
• 2 तैयारी
• ३ उपयोग
• 4 गुणवत्ता नियंत्रण
• 5 अंतिम विचार
• 6 संदर्भ

आधार

चयनात्मक

ईएमबी एगर सूक्ष्म रूप से चयनात्मक है क्योंकि इसमें एनिलिनिक रंजक (ईओसिन और मिथाइलीन ब्लू) शामिल हैं, जो अवरोधकों के रूप में कार्य करते हैं, अधिकांश ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया के विकास को रोकते हैं और कुछ ग्राम-नेगेटिव बैसिली की मांग करते हैं।.

हालांकि, इस आगर में यह दोष है कि कुछ ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया निरोधात्मक पदार्थों की उपस्थिति का विरोध कर सकते हैं और छोटे रंगहीन पंचर कॉलोनियों के रूप में विकसित हो सकते हैं, जैसे कि एंटरोकोकस फेसेलिस और कुछ Staphylococcus.

आप कुछ खमीर भी विकसित कर सकते हैं, जैसे कि कैंडिडा अल्बिकंस कॉम्प्लेक्स, यह बहुत छोटे गुलाबी उपनिवेश देगा। यहां तक ​​कि क्लैमाइडोस्पोर्स को भी इस खमीर से विकसित किया जा सकता है यदि नमूना गहराई से बोया जाता है.

अंतर

दूसरी ओर, ईएमबी एगर भी एक अंतर माध्यम है, क्योंकि ये डाई एक साथ (ईओसिन और मेथिलीन ब्लू) अम्लीय पीएच में एक अवक्षेप बनाने की संपत्ति होती है, इसलिए वे इसके उत्पादन के संकेतक के रूप में काम करते हैं।.

इसलिए, कमजोर रूप से किण्वित लैक्टोज या सुक्रोज बैक्टीरिया 24 से 48 घंटों में बैंगनी कालोनियों का उत्पादन करते हैं। उदाहरण के लिए जेनेरा क्लेबसिएला, एंटरोबैक्टीरिया और सेराटिया.

वे बैक्टीरिया जो दृढ़ता से लैक्टोज को किण्वित करते हैं, जैसे कि एस्केरिचिया कोलाई, या सुक्रोज, के रूप में येरसिनिया एंटरोकोलिटिका या प्रोटीन पेननेरी, इन प्रजातियों में एक धातु की चमक की विशेषता देते हुए, एक हरे रंग की काली अवक्षेप बनाते हैं.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यदि ईएमबी लेविन माध्यम का उपयोग किया जाता है (बिना सुक्रोज के), येरसिनिया एंटरोकोलिटिका और प्रोटीन पेननेरी वे पारदर्शी उपनिवेश बनाएंगे.

बैक्टीरिया जो लैक्टोज या सुक्रोज को किण्वित नहीं करते हैं, वे पेप्टोन की उपस्थिति से पोषित होते हैं, जो बैक्टीरिया के विकास के लिए आवश्यक अमीनो एसिड और नाइट्रोजन प्रदान करते हैं, और पारदर्शी कालोनियों का उत्पादन करते हैं। उदाहरण के लिए, साल्मोनेला और शिगेला जेनरा, दूसरों के बीच में.

इसी तरह, यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि जीनस एसीनेटोबेक्टर लैवेंडर नीले रंग की कॉलोनियों को पेश कर सकता है, भले ही यह लैक्टोज का किण्वक नहीं है, न ही सूक्रोज, लेकिन उनके सेल की दीवार में मेथेन ब्लू को ठीक करने की संपत्ति है। यह अन्य ऑक्सीडेटिव बैक्टीरिया के साथ भी हो सकता है.

तैयारी

मूल निर्जलित माध्यम हल्का बेज है.

इस संस्कृति माध्यम को तैयार करने के लिए, निर्जलित माध्यम के 36 ग्राम वजन और एक लीटर में आसवित पानी से निलंबित होना चाहिए.

आराम से 5 मिनट के लिए मिश्रण को छोड़ने के बाद, फिला को एक गर्मी स्रोत में लाएं, जब तक कि यह उबाल न हो जाए तब तक सख्ती से और लगातार मिश्रण करें।.

इसके बाद, भंग संस्कृति माध्यम को 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव का उपयोग करके निष्फल किया जाना चाहिए.

समय के अंत में, इसे आटोक्लेव से हटा दिया जाता है और थोड़ी देर आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है। फिर इसे प्रत्येक बाँझ पेट्री डिश में 15 से 20 मिलीलीटर अगर के बीच गर्म (45 - 50 डिग्री सेल्सियस) भी परोसा जाता है। मध्यम नीला लिटमस होना चाहिए.

प्लेटों को परोसने के बाद थोड़ा खुला छोड़ दिया जाता है जब तक कि आगर थोड़ा ठंडा न हो जाए। फिर उन्हें कवर किया जाता है और पूरी तरह से जमने दिया जाता है। बाद में, उन्हें एक उल्टे पट्टिका धारक का आदेश दिया जाता है और उनका उपयोग होने तक एक रेफ्रिजरेटर (8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत किया जाता है.

इस प्रक्रिया को अधिमानतः एक लामिना का प्रवाह हुड में या संदूषण से बचने के लिए बेंसन बर्नर के सामने किया जाता है.

यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि प्रत्येक वाणिज्यिक घर संस्कृति माध्यम को तैयार करने के लिए तौला जाने वाली राशि का संकेत देगा.

मध्यम का अंतिम पीएच 7.2 pH 0.2 होना चाहिए

अनुप्रयोगों

इस माध्यम का उपयोग मूत्र और मल या किसी भी प्रकार के नैदानिक ​​नमूनों को बोने के लिए किया जाता है, खासकर अगर गैर-मांग वाले ग्राम-नकारात्मक बेसिली की उपस्थिति पर संदेह किया जाता है, जैसे कि बैसिली परिवार एंटरोबैक्टीरिया से संबंधित है, जो इस माध्यम में बहुत अच्छी तरह से बढ़ता है.

जेनेगा शिगेला और साल्मोनेला के एंटरोपैथोजेनिक बैक्टीरिया उनके रंगहीन या थोड़ा एम्बर कालोनियों द्वारा प्रतिष्ठित हैं.

अन्य गैर-किण्वन लैक्टोज बेसिली भी विकसित होते हैं, जैसे कि एरोमोनस, स्यूडोमोनस, एसिनोबोबैक्टर, अन्य।.

इसी तरह, यह माध्यम भोजन और पानी के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण में बहुत उपयोगी है, क्योंकि यह कोलीफॉर्म के निर्धारण के पूर्ण पुष्टिकरण चरण के लिए आदर्श है, अर्थात् उपस्थिति की पुष्टि करने के लिए ई। कोलाई सबसे संभावित संख्या तकनीक (एनएमपी) से टर्बिड ईसी शोरबा से.

गुणवत्ता नियंत्रण

यह सत्यापित करने के लिए कि नई खेती की संस्कृति माध्यम अच्छी तरह से काम करता है, उपनिवेशों की विशेषताओं का निरीक्षण करने के लिए नियंत्रण उपभेदों को लगाया जा सकता है और यह सत्यापित करें कि वे उम्मीद के मुताबिक देते हैं.

इसके लिए, एटीसीसी उपभेदों या अच्छी तरह से पहचाने गए उपभेदों ई। कोलाई, एंटरोबैक्टर एरोजेन, क्लेबसिएला सपा, साल्मोनेला टाइफिम्यूरियम, शिगेला फ्लेक्सनेरी, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा और कुछ ग्राम पॉजिटिव बैक्टीरिया, जैसे एस ऑरियस.

उम्मीद है कि ई। कोलाई हरी धातु की चमक के साथ अच्छी तरह से विकसित नीले-काले रंग की कालोनियों का निर्माण करें। जब तक है, एंटरोबैक्टर एरोजेन और क्लेबसिएला सपा उन्हें अच्छी तरह से विकसित श्लेष्म कालोनियों को नीला-काला देना चाहिए.

इसके भाग के लिए, साल्मोनेला typhimurium और शिगेला फ्लेक्सनेरी, उन्हें बड़ी कॉलोनियों को विकसित करना चाहिए, रंगहीन या मामूली एम्बर रंग के साथ.

अंत में शैली स्यूडोमोनास एरुगिनोसा यह अनियमित आकार की रंगहीन कॉलोनियों के रूप में बढ़ता है, जबकि ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया पूरी तरह से बाधित होना चाहिए या बहुत छोटे उपनिवेशों के साथ कम हो जाना चाहिए.

अंतिम विचार

कभी-कभी नसबंदी से नारंगी रंग के माध्यम का निरीक्षण करते हुए मेथिलीन नीला हो जाता है। मिथाइलीन नीले रंग के ऑक्सीकरण और बैंगनी रंग को ठीक करने के लिए, इसे धीरे से मिलाया जाना चाहिए जब तक कि रंग ठीक न हो जाए.

इसके अलावा, नसबंदी के बाद डाई को उपजाया जा सकता है, इसलिए पेट्री डिश को परोसने से पहले इसे अच्छी तरह मिला लेना चाहिए.

संदर्भ

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