आगर में मानक नींव, तैयारी और उपयोग हैं

मानक खाता आगर एक ठोस, गैर-चयनात्मक संस्कृति माध्यम है, जिसे अन्य खाद्य पदार्थों के अलावा पीने के पानी, अपशिष्ट जल, दूध पेय के नमूनों में मौजूद एरोबिक माइक्रोबियल लोड की मात्रा के लिए बनाया गया है। इस माध्यम को PCA agar के नाम से भी जाना जाता है, अंग्रेजी प्लेट काउंट आगर में इसके संक्षिप्त रूप के लिए। यह 1953 में बुचबिंदर, बारिस और गोल्डस्टीन द्वारा बनाया गया था.

मानक अगर माध्यम माध्यम खमीर निकालने, ट्रिप्टीन, ग्लूकोज, अगर और आसुत जल से बना है। इस सूत्रीकरण में बुनियादी पोषण तत्व होते हैं जो वर्तमान एरोबिक माइक्रोबियल लोड के विकास की अनुमति देते हैं, मांग नहीं.

चूंकि माध्यम में अवरोधक नहीं होते हैं, बैक्टीरिया बिना किसी प्रतिबंध के विकसित हो सकता है, इसलिए यह सामान्य कॉलोनी की गिनती के लिए आदर्श है। हालांकि, प्लेट की मात्रा का पता लगाने की तकनीक में मौजूद सभी बैक्टीरिया का पता नहीं चलेगा, लेकिन केवल वे जो पर्यावरणीय परिस्थितियों में बढ़ने में सक्षम हैं, जिनके लिए मानक बुवाई की गई है।.

इस अर्थ में, प्लेट परिमाणीकरण तकनीक सामान्य रूप से एरोबिक मेसोफिलिक प्रकार के बैक्टीरिया की मात्रा निर्धारित करने का प्रयास करती है, जो कि 25 और 40 डिग्री सेल्सियस के बीच के तापमान पर विकसित होती है, 37 डिग्री सेल्सियस पर विकास का इष्टतम तापमान।.

यह जीवाणु समूह बहुत महत्वपूर्ण है, क्योंकि मनुष्य के लिए अधिकांश रोगजनक बैक्टीरिया हैं.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि कभी-कभी भोजन में मौजूद साइकोफिलिक बैक्टीरिया की मात्रा को निर्धारित करना दिलचस्प हो सकता है। ये जीवाणु वे होते हैं जो कम तापमान पर विकसित होते हैं (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.

इसी तरह, थर्मोफिलिक बैक्टीरिया, जो 50 डिग्री सेल्सियस से 80 डिग्री सेल्सियस या उससे अधिक के बीच की सीमा में विकसित होते हैं, कुछ प्रकार के खाद्य पदार्थों जैसे डिब्बाबंद में महत्वपूर्ण हो सकते हैं.

माइक्रोबियल मात्रा का ठहराव कॉलोनी बनाने वाली इकाइयों (CFU) में प्रति ग्राम या मिलीमीटर के नमूने में व्यक्त किया जाता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 तैयारी
  • 2.1 प्लेट डालने की तकनीक के लिए
  • 2.2 सतह रोपण के लिए
• 3 का उपयोग करें
  • 3.1 प्लेट डालने की तकनीक (गहराई से बोई गई)
  • 3.2 तकनीक सतह पर बोई गई
• 4 गुणवत्ता नियंत्रण
• 5 सीमाएँ
• 6 संदर्भ

आधार

मानक गणना माध्यम गैर-मांग वाले एरोबिक बैक्टीरिया के संतोषजनक विकास की अनुमति देने के लिए डिज़ाइन किया गया है, क्योंकि खमीर निकालने, ट्राइफाइन और ग्लूकोज अच्छे माइक्रोबियल विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्व प्रदान करते हैं.

दूसरी ओर, मध्यम में एक स्पष्ट रंग और एक पारदर्शी उपस्थिति है, यही वजह है कि यह गहरी बुवाई की विधि द्वारा विकसित कालोनियों को प्रदर्शित करने के लिए आदर्श है (प्लेट में डालना).

Drigalski के एक स्पैटुला के साथ सतह पर बुवाई की विधि द्वारा कालोनियों की गणना करना भी संभव है.

जब माइक्रोबियल लोड अधिक होता है, तो अध्ययन के तहत नमूने के दशमलव dilutions CFUs को गिनने के लिए बनाया जाना चाहिए.

यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यह माध्यम अमेरिकन पब्लिक हेल्थ एसोसिएशन (APHA) द्वारा एरोबिक मेसोफाइल की गिनती के लिए अनुशंसित है.

तैयारी

निर्जलित माध्यम का 23.5 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। मिश्रण को पूरी तरह से घोलने के लिए इसे उबालने तक अक्सर गर्म करना चाहिए। उप-निम्न चरणों का उपयोग करने के लिए सीडिंग तकनीक पर निर्भर करता है.

प्लेट डालने की तकनीक के लिए

12 से 15 मिलीलीटर परीक्षण ट्यूबों में बांटकर वितरित करें। इसके बाद, 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ। ब्लॉक के रूप में लंबवत रूप से जमने दें। उपयोग करने तक फ्रिज में स्टोर करें.

जब यह इस्तेमाल होने वाला हो तब क्यू को पिघलाएं। एक बार पिघलने के बाद, इसे 44-47 डिग्री सेल्सियस पर पानी के स्नान में रखें, जबकि नमूने तैयार किए जा रहे हैं.

सतह पर रोपण के लिए

121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में मध्यम बाँझ और फिर बाँझ पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर वितरित। उपयोग करने तक रेफ्रिजरेटर में जमने, पलटने और स्टोर करने की अनुमति दें.

उपयोग करने से पहले प्लेटों को तड़काएँ। माध्यम का पीएच 7.0 should 0.2 होना चाहिए.

उपयोग

पानी और भोजन के सूक्ष्मजीवविज्ञानी विश्लेषण के दौरान एरोबिक मेसोफिल गिनती तकनीक में अगर मानक गणना का उपयोग किया जाता है। एरोबिक मेसोफिल्स की गिनती आवश्यक है, क्योंकि यह अध्ययन के तहत नमूने की स्वच्छता गुणवत्ता निर्धारित करता है.

इस तकनीक का उपयोग (इस माध्यम का उपयोग करके) अपने मात्रा का ठहराव के लिए पृथक कालोनियों के स्थूल दृश्य की अनुमति देता है.

पट्टिका डालने का कार्य तकनीक (गहराई से वरीयता प्राप्त)

-प्रक्रिया

तकनीक में निम्नलिखित शामिल हैं:

1) मौजूद बैक्टीरिया को फिर से विभाजित करने के लिए नमूने को होमोजिनाइज करें.

2) एक बाँझ शीशी या बैग में एक प्रारंभिक निलंबन किया जाता है, जो 90 मिलीलीटर मंदक (10) में 10 ग्राम या 10 मिलीलीटर नमूने के अनुपात का सम्मान करता है।^-1).

3) प्रारंभिक निलंबन से प्रासंगिक दशमलव dilutions नमूना के प्रकार पर निर्भर करता है। Ex: (१०)^-2, 10^-3, 10^-4)। Dilutions पेप्टोन पानी या फॉस्फेट बफर के साथ किया जाता है.

ऐसा करने के लिए, प्रारंभिक निलंबन का 1 मिलीलीटर और मंदक के 9 मिलीलीटर में जगह लें, यदि आवश्यक हो तो कमजोर पड़ने को जारी रखें, अब कमजोर पड़ने का 1 मिलीलीटर लें।^-2 और इसी तरह.

4) प्रत्येक कमजोर पड़ने पर 1 मिलीलीटर लें और खाली बाँझ पेट्री डिश में रखें.

5) प्रत्येक प्लेट में 12 से 15 मिली स्टैण्डर्ड काउंट आगर पहले पिघलें और 44 - 47 ° C पर सेट करें.

6) समान रूप से अगर नमूना को वितरित करने और जमने की अनुमति देने के लिए प्लेटों को चिकनी रोटरी आंदोलनों दें.

7) रिवर्स प्लेट्स और 24 से 48 घंटों के लिए एरोबायोसिस में 37 डिग्री सेल्सियस पर सेते हैं.

8) समय समाप्त होने के बाद, प्लेटों की जांच करने और उपनिवेशों को उस कमजोर पड़ने में गिनने के लिए आगे बढ़ें जो इसे अनुमति देता है। इसे उन प्लेटों की गिनती के लिए चुना जाता है जिनकी संख्या 30 से 300 सीएफयू के बीच होती है.

गिनती मैन्युअल रूप से की जा सकती है या कॉलोनी काउंटर उपकरण का उपयोग किया जा सकता है.

प्रति मिलीलीटर के अनुमत मूल्य मानकों के अनुसार एक देश से दूसरे देश में भिन्न हो सकते हैं.

-UFC की गणना

सामान्य गणना निम्न सूत्र का उपयोग करके की जाती है:

परिणामों को 1 या 2 अंकों में व्यक्त करें, उचित आधार 10 से गुणा करें। उदाहरण: यदि परिणाम 16.545 है, तो यह तीसरे अंक के आधार पर 17.000 पर आधारित है और निम्नानुसार व्यक्त किया जाएगा: 1.7 x 10⁴. अब, यदि परिणाम १६,४३६ था, १६,००० का गोल और १.६ x १० बताया गया है⁴.

तकनीक सतह पर लगाई गई

-प्रक्रिया

-प्रत्यक्ष नमूने के 0.1 मिलीलीटर के साथ टीका लगाएं यदि यह तरल है, तो प्रारंभिक निलंबन 10^-1 या लगातार dilutions 10^-2, 10^-3 आदि, एक मानक खाता अगर प्लेट के बीच में.

-समान रूप से Drigalski स्पैटुला या एल के आकार का ग्लास रॉड के साथ नमूना वितरित करें। 10 मिनट के लिए खड़े रहें.

-प्लेटों को उलट दें और 24 से 48 घंटों के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एरोबियोसिस में सेते हैं.

-कॉलोनियों की गणना करने के लिए आगे बढ़ें, उन प्लेटों को चुनें जो 20 - 250 सीएफयू के बीच की सीमा में हैं.

-UFC की गणना

गणना के लिए, कमजोर पड़ने वाले कारक को लागू किया जाता है, जो कि व्युत्क्रम है। संख्या 2 महत्वपूर्ण अंकों (तीसरे अंक के अनुसार गोलाई) के लिए गोल है और आधार 10 शक्ति में व्यक्त की जाती है। उदाहरण के लिए, यदि 224 CFU को कमजोर पड़ने के बिना नमूने में गिना जाता है (10)^-1), 22 x 10 बताया गया है¹  UFC, लेकिन यदि आंकड़ा 225 था तो यह 23 x 10 बताया गया है¹ यूएफसी.

अब, यदि आप कमजोर पड़ने वाले 10 में 199 सीएफयू की गिनती करते हैं^-3, 20 x 10 की सूचना दी जाएगी⁴ UFC, लेकिन अगर 153 सीएफयू को उसी कमजोर पड़ने में गिना जाता है, तो 15 x 10 की सूचना दी जाएगी⁴ यूएफसी.

गुणवत्ता नियंत्रण

मानक गणना संस्कृति माध्यम का मूल्यांकन ज्ञात प्रमाणित उपभेदों का उपयोग करके किया जा सकता है, जैसे: एस्केरिचिया कोलाई एटीसीसी 8739, स्टैफिलोकोकस ऑरियस एटीसीसी 6538, बैसिलस सबटिलिस एटीसीसी 6633, लैक्टोबैसिलस किण्वक एटीसीसी 9338, स्टेफिलोकोकस एपिडर्मिडिस एटीसीसी 12228, शिगेला फ्लेक्सनेरी एटीसीसी 12022.

यदि संस्कृति माध्यम इष्टतम परिस्थितियों में है, तो सभी मामलों में संतोषजनक वृद्धि अपेक्षित है, सिवाय इसके एल। किण्वन इसका नियमित प्रदर्शन हो सकता है.

संस्कृति माध्यम की बाँझपन का आकलन करने के लिए, प्रत्येक तैयार बैच की एक या दो प्लेटें (असिंचित) को 24 घंटे के लिए एरोबायोसिस में 37 ° C पर ऊष्मायन किया जाना चाहिए। इस समय के अंत में, माध्यम का कोई विकास या रंग परिवर्तन नहीं देखा जाना चाहिए।.

सीमाओं

-Agar को एक से अधिक बार पिघलाएं नहीं.

-तैयार माध्यम 3 महीने तक रह सकता है जब तक कि इसे रेफ्रिजरेटर में रखा जाता है और प्रकाश से संरक्षित किया जाता है.

-यह माध्यम सूक्ष्मजीवों की मांग के लिए उपयुक्त नहीं है, और न ही एनारोबेस.

संदर्भ

1. दवाओं और खाद्य प्रौद्योगिकी के राष्ट्रीय प्रशासन (ANMAT)। भोजन का माइक्रोबायोलॉजिकल विश्लेषण, आधिकारिक विश्लेषणात्मक पद्धति, संकेतक सूक्ष्मजीव। 2014 वॉल्यूम 3. उपलब्ध: amat.gov.ar पर
2. डीम्को फ्रांसिस्को सोरिया मेलगुइज़ो प्रयोगशालाएँ, एस.ए. प्लेट काउंट आगर। 2009. पर उपलब्ध: http://f-soria.es
3. प्रयोगशालाएँ कॉनडा प्रोनाडीसा। APHA और ISO 4833 के अनुसार मानक तरीकों (PCA) के लिए Agar। पर उपलब्ध: condalab.com
4. प्रयोगशालाओं ब्रिटानिया। आगर प्लेट पर गिनती। 2015 में उपलब्ध: britanialab.com
5. कैमाचो ए, जाइल्स एम, ऑर्टेगॉन ए, पालो एम, सेरानो बी और वेल्ज़क्वेज़ ओ। 2009। माइक्रोबायोलॉजिकल एनालिसिस ऑफ़ फूड्स के लिए तकनीक। दूसरा संस्करण। रसायन विज्ञान संकाय, यूएनएएम। मेक्सिको। पर उपलब्ध: depa.fquim.unam