सीमन्स एगर फाउंडेशन, तैयारी और उपयोग को साइट्रेट करते हैं

सीमन्स सिट्रेट एगर यह सूक्ष्मजीवों, विशेष रूप से ग्राम-नकारात्मक बेसिली की पहचान करने के लिए जैव रासायनिक परीक्षण के रूप में उपयोग किया जाने वाला एक ठोस माध्यम है। मूल माध्यम 1923 में कोसर द्वारा बनाया गया था.

कोसर के साइट्रेट माध्यम में सोडियम फास्फेट, अमोनियम फॉस्फेट, मोनोपोटेशियम फॉस्फेट, मैग्नीशियम सल्फेट और सोडियम साइट्रेट युक्त शोरबा होता है।.

जैसा कि देखा जा सकता है, माध्यम में एकमात्र कार्बन स्रोत साइट्रेट है, और नाइट्रोजन अमोनियम फॉस्फेट है, इन तत्वों के स्रोत के रूप में प्रोटीन और कार्बोहाइड्रेट को छोड़ा जा रहा है, वे आमतौर पर अन्य मीडिया में मौजूद हैं।.

इसलिए, उस माध्यम में जीवाणु को केवल तभी पुन: उत्पन्न किया जा सकता है जब वह साइट्रेट कार्बन को लेने में सक्षम हो। यदि माध्यम में टर्बिडिटी थी, तो परीक्षण सकारात्मक था, हालांकि इसका नुकसान यह था कि गैर-विशिष्ट टर्बिडिटी हो सकती है.

इस समस्या का समाधान सीमन्स ने कोसर के मूल फार्मूले में अगर और ब्रोमोथाइमॉल ब्लू को मिलाकर किया। यद्यपि सिद्धांत समान है, इसकी व्याख्या अलग तरह से की जाती है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 सीडिंग मोड
  • 1.2 व्याख्या
• 2 तैयारी
• 3 का उपयोग करें
• 4 अंतिम विचार
  • 4.1 इनोकुलम
  • ४.२ बीज
  • 4.3 रंग की तीव्रता
• 5 संदर्भ

आधार

कुछ बैक्टीरिया लैक्टिक एसिड के किण्वन या उत्पादन की अनुपस्थिति में जीवित रहने की क्षमता रखते हैं, अन्य सब्सट्रेट के उपयोग के माध्यम से ऊर्जा प्राप्त करने की आवश्यकता होती है। इस परीक्षण में कार्बन का एकमात्र स्रोत साइट्रेट है.

इन परिस्थितियों में जीवित रहने में सक्षम बैक्टीरिया, ट्राइकारबॉक्सिलिक एसिड चक्र या साइट्रेट किण्वन चक्र का उपयोग करके पारंपरिक मार्ग के विकल्प के माध्यम से साइट्रेट को जल्दी से मेटाबोलाइज करते हैं।.

बैक्टीरिया द्वारा साइट्रेट के अपचय को कोनेजाइम ए के हस्तक्षेप के बिना एक एंजाइमैटिक तंत्र शामिल है। इस एंजाइम को साइट्रिकस (साइट्रेट ऑक्सालोसेट-लीसेज़) या साइट्रेट डेस्मोलेज़ के रूप में जाना जाता है। प्रतिक्रिया के लिए एक द्विध्रुवीय उद्धरण की उपस्थिति की आवश्यकता होती है, जो इस मामले में मैग्नीशियम द्वारा आपूर्ति की जाती है.

प्रतिक्रिया से ऑक्सालोसेटेट और पाइरूवेट उत्पन्न होता है, जो फिर नाइट्रोजन के स्रोत के उपयोग से बनने वाले एक क्षारीय पीएच के बीच में कार्बनिक अम्ल को जन्म देता है। इन कार्बनिक अम्लों का उपयोग कार्बन स्रोत के रूप में किया जाता है जो कार्बोनेट और बाइकार्बोनेट उत्पन्न करते हैं, जो माध्यम को आगे बढ़ाते हैं.

बुवाई मोड

सीमन्स साइट्रेट माध्यम को सीधे लूप या सुई का उपयोग करके मछली की पूंछ में हल्के ढंग से टीका लगाया जाना चाहिए, और 24 घंटे के लिए 35-37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाना चाहिए। समय के अंत में परिणाम देखे जाते हैं.

सीडिंग केवल अगर की सतह पर की जाती है। पंचर न करें.

व्याख्या

यदि माध्यम मूल रंग (हरा) का है और कोई दिखाई देने वाला विकास नहीं है, तो परीक्षण नकारात्मक है, लेकिन यदि माध्यम नीले रंग में बदलता है, तो यह क्षारीय उत्पादों की उपस्थिति को इंगित करता है, जिसे पीएच संकेतक द्वारा पता लगाया जाता है। इस मामले में परीक्षण सकारात्मक है.

ऐसा इसलिए होता है क्योंकि यदि जीवाणु साइट्रेट के कार्बन का उपयोग करता है तो यह अमोनियम फॉस्फेट के नाइट्रोजन को लेने में भी सक्षम है जिसके साथ यह अमोनिया जारी करता है, माध्यम को क्षारीय करता है.

दूसरी ओर, यदि माध्यम में जीवाणुओं की वृद्धि देखी जाती है, लेकिन रंग में कोई परिवर्तन नहीं होता है, तो परीक्षण को भी सकारात्मक माना जाना चाहिए, क्योंकि यदि वृद्धि होती है, तो इसका मतलब है कि बैक्टीरिया कार्बन स्रोत के रूप में साइट्रेट का उपयोग करने में सक्षम था, हालांकि इस समय एक पीएच परिवर्तन नहीं है (कभी-कभी यह लग सकता है).

यदि अंतिम रंग की व्याख्या में संदेह है, तो इसकी तुलना बिन बुलाए साइट्रेट की ट्यूब से की जा सकती है.

तैयारी

एक लीटर पानी के लिए निर्जलित माध्यम का 24.2 ग्राम वजन। मिक्स करें और लगभग 5 मिनट तक खड़े रहने दें। मध्यम को 1 या दो मिनट के लिए गर्म करके भंग करें, अक्सर सरगर्मी करें.

15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर टेस्ट ट्यूब और आटोक्लेव में 4 मिलीलीटर की सेवा करें। आटोक्लेव छोड़ते समय, इस तरह से एक सहारे की सहायता से झुकें, जिससे कि अग्र भाग एक गुच्छे की चोटी के रूप में थोड़ा क्लिट या नीचे और अधिक बेवल के साथ जम जाए.

साइट्रेट माध्यम का अंतिम पीएच 6.9 (हरा) है। पीएच परिवर्तन के लिए यह माध्यम बहुत संवेदनशील है.

पीएच 6 या उससे नीचे, मध्यम पीला हो जाता है। यह रंग बैक्टीरिया के साथ परीक्षण में नहीं मनाया जाता है.

और पीएच 7.6 या उससे ऊपर, मध्यम तीव्र प्रुशियन नीला में बदल जाता है.

उपयोग

सीमन्स साइट्रेट अगर का उपयोग कुछ सूक्ष्मजीवों की पहचान के लिए किया जाता है, विशेष रूप से एंटरोबैक्टीरिया परिवार और अन्य ग्लूकोज-गैर-किण्वन बेसिली से संबंधित बेसिली।.

अंतिम विचार

सीमन्स साइट्रेट माध्यम एक बहुत ही नाजुक परीक्षा है, क्योंकि कुछ गलतियां होने पर झूठी सकारात्मकता प्राप्त की जा सकती है.

ध्यान रखा जाना चाहिए कि निम्नलिखित हैं:

inoculum

बहुत मोटी या भरी हुई बैक्टीरियल इनोकुलम न बनाएं, क्योंकि यह रोपण स्थल पर तांबे के पीले रंग का विकास कर सकता है, बाकी माध्यमों को प्रभावित किए बिना, लेकिन यह इस विश्वास को जन्म दे सकता है कि विकास है। इसका मतलब यह नहीं है कि परीक्षण की सकारात्मकता.

इसी तरह, एक मोटी inoculum एक झूठी सकारात्मक उत्पन्न कर सकता है, क्योंकि मरने वाले बैक्टीरिया की कोशिका दीवारों के भीतर पूर्वनिर्मित कार्बनिक यौगिक पीएच संकेतक को चालू करने के लिए पर्याप्त कार्बन और नाइट्रोजन छोड़ सकते हैं।.

इसलिए, आदर्श यह है कि प्लेटिनम हैंडल के बजाय सुई का उपयोग करके, अतिरिक्त सामग्री लेने से बचें.

लगाए

दूसरी ओर, जब प्रश्न में सूक्ष्मजीव की पहचान के लिए जैव रासायनिक परीक्षणों की बैटरी को लगाया जा रहा है, तो यह महत्वपूर्ण है कि प्रोटीन या कार्बोहाइड्रेट को दूसरे माध्यम से खींचने से बचने के लिए साइट्रेट टेस्ट सबसे पहले इनोक्यूट किया जाए।.

इस परिस्थिति में एक झूठी सकारात्मक प्राप्त करना संभव है, क्योंकि इनमें से कोई भी पदार्थ जो गलती से पेश किया जाता है, को चयापचय किया जाएगा और पीएच में बदलाव का कारण होगा।.

पदार्थों के खींचने से बचने का एक और तरीका यह है कि हैंडल को अच्छी तरह से जलाया जाए और एक परीक्षण और दूसरे के बीच नया इनोकुलम लिया जाए.

कॉलोनी को इनोकुलम करने के लिए स्पर्श करते समय भी सावधानी बरती जानी चाहिए, क्योंकि इससे एगार के उस हिस्से को संस्कृति से खींचने के लिए बचा जाना चाहिए जहां से बैक्टीरिया आते हैं, पहले से समझाया गया था.

इस अर्थ में, मत्स्येन, शेरिस और ब्रैनसन अन्य कार्बन स्रोतों के हस्तांतरण से बचने के लिए साइट्रेट परीक्षण का टीका लगाने से पहले शारीरिक समाधान में इनोकुलम को पतला करने की सलाह देते हैं।.

रंग की तीव्रता

यह ध्यान में रखा जाना चाहिए कि परीक्षण सकारात्मक होने पर उत्पादित रंग की तीव्रता वाणिज्यिक घर के अनुसार भिन्न हो सकती है.

इसके अलावा, ऐसे सूक्ष्मजीव हैं जो 24 घंटों में सकारात्मक परीक्षण करते हैं, लेकिन पीएच में परिवर्तन का उत्पादन करने के लिए 48 घंटे या उससे अधिक की आवश्यकता वाले अन्य उपभेद हैं.

संदर्भ

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