आगर चॉकलेट फाउंडेशन, उपयोग और तैयारी

चॉकलेट अगर यह एक ठोस, समृद्ध, गैर-चयनात्मक और गैर-विभेदक संस्कृति माध्यम है। इसका उपयोग मुख्य रूप से सूक्ष्मजीवों के अलगाव के लिए पोषण के दृष्टिकोण से किया जाता है, हालांकि यह किसी भी प्रकार के बैक्टीरिया को विकसित कर सकता है.

यही कारण है कि इसकी उपयोगिता विशेष रूप से नमूनों की सीडिंग में बढ़ जाती है जो सामान्य रूप से बाँझ होते हैं, जैसे कि सीएसएफ और संयुक्त तरल पदार्थ। यद्यपि यह बहुरूपी नमूनों को बोने के लिए चुने गए साधनों के भीतर भी शामिल है, लेकिन इन मामलों में एंटीबायोटिक दवाओं को जोड़ना आवश्यक है जो सहवर्ती वनस्पतियों को रोकते हैं.

इस माध्यम में चॉकलेट के समान एक विशेषता भूरा रंग है, इसलिए इसका नाम। तैयारी रक्त अगर के समान है, केवल इस मामले में रक्त को गर्म करना चाहिए ताकि लाल रक्त कोशिकाएं टूट जाएं.

रक्त अगर की तरह इसकी तैयारी बहुत नाजुक होती है, क्योंकि यह आसानी से दूषित हो जाती है। इस कारण से कई प्रयोगशालाएँ वाणिज्यिक घरों द्वारा तैयार किए गए इस माध्यम का अधिग्रहण करना पसंद करती हैं जो उनकी गुणवत्ता की गारंटी देता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 का उपयोग करता है
  • 2.1 कोलंबिया आगर के साथ चॉकलेट एगर तैयार
  • 2.2 जीसी आधार अगर (गोनोकोकी के लिए) के साथ तैयार चॉकलेट अगर
  • 2.3 म्यूलर हिंटन आगर के साथ चॉकलेट एगर तैयार
  • 2.4 चॉकलेट एगर थायर मार्टिन आगर के साथ तैयार
• 3 तैयारी
  • 3.1 गणना
  • 3.2 वजन और भंग
  • ३.३ बाँझ बनाना
  • 3.4 रक्त का एकत्रीकरण
  • 3.5 रक्त का उपयोग किए बिना चॉकलेट अगर तैयार करने का दूसरा तरीका
• 4 गुणवत्ता नियंत्रण
• 5 संदर्भ

आधार

यह माध्यम पोषक तत्वों और गर्म रक्त से भरपूर अगर के आधार से बना है। लाल रक्त कोशिकाओं के हेमोलिसिस कारक एक्स (हेमिन) और कारक वी (एनएडी) प्रदान करता है, जो कुछ सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए आवश्यक हैं, जैसे कि जीनस। हेमोफिलस. के अलगाव के लिए भी यह बहुत उपयोगी है निसेरियास सपा.

रक्त अगर की तरह, अलग-अलग मीडिया को आधार के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है जो जरूरत पर निर्भर करता है। उपयोग किए जाने वाले मीडिया में मस्तिष्क हृदय जलसेक और ट्रायप्टिसेज़ सोया अगर हैं, हालांकि सबसे अधिक अनुशंसित कोलंबिया एगर, मुलर हिंटन, जीसी एगर और थायर मार्टिन अगर हैं।.

चॉकलेट एगर के कुछ वैरिएंट्स में एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध समृद्ध पूरक शामिल है जिसे Isovitalex या Polivitex कहा जाता है.

इन सप्लीमेंट्स में विटामिन बी होता है₁₂, L-glutamine, adenine, guanine Hydrochloride, p-aminobenzoic acid, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), थायमिन पायरोफ़ॉस्फेट, फेरिक नाइट्रेट, थायरिन हाइड्रोक्लोराइड, सिस्टीन हाइड्रोक्लोराइड, L- सिस्टीन और ग्लूकोज.

यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि चॉकलेट अगर रक्त एगर की तुलना में अधिक समृद्ध है, लेकिन हेमोलिसिस पैटर्न के अवलोकन की अनुमति नहीं देता है.

अनुप्रयोगों

चॉकलेट एगर कोलंबिया आगर के साथ तैयार

इस माध्यम में कैसिइन और दिल अग्नाशय पचा, पचा मांस पेप्टाइड, सोडियम क्लोराइड, अगर, खमीर निकालने और कॉर्न स्टार्च होता है। यह विटामिन, खनिज और आवश्यक अमीनो एसिड में भी समृद्ध है.

गर्म रक्त के साथ यह आधार जीनस नीसेरिया के बैक्टीरिया के अलगाव के लिए आदर्श है। दूसरी ओर, यदि ब्रूसेला के लिए एक पूरक माध्यम में जोड़ा जाता है, तो उपरोक्त सूक्ष्मजीव को अलग किया जा सकता है। घोड़े के रक्त का उपयोग करके परिणामों में सुधार किया जाता है.

चॉकलेट एगर जीसी बेस एगर (गोनोकोकी के लिए) के साथ तैयार किया गया

इस माध्यम में पेप्टोन, कॉर्न स्टार्च, मोनोबैसिक और डिबासिक बफ़र्स, सोडियम क्लोराइड और अगर शामिल हैं.

अधिकांश व्यावसायिक रूप से तैयार चॉकलेट एगर प्रस्तुतियां इस आधार के साथ आती हैं और इसमें कोई गर्म रक्त नहीं होता है, लेकिन हेमिन का एक सिंथेटिक मिश्रण और विकास कारकों, विटामिन, खनिज, अमीनो एसिड, कारक वी और ग्लूकोज का रासायनिक पूरक होता है।.

चॉकलेट अगार मुलर हिंटन अगर के साथ तैयार किया गया है

इसका उपयोग सूक्ष्मजीवों की मांग के रोगाणुरोधी संवेदनशीलता परीक्षण करने के लिए किया जाता है, जैसे कि स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया 5% गर्म राम रक्त का उपयोग करना.

यह निएसेरियस और हेमोफिलस के प्राथमिक अलगाव के लिए भी कार्य करता है, लेकिन अलगाव के विशेष मामले में हेमोफिलस घोड़े के खून का उपयोग पसंद किया जाता है, क्योंकि यह कारक एक्स और वी का एक समृद्ध स्रोत है.

दूसरी ओर, यदि बोया जाने वाला नमूना गैर-बाँझ क्षेत्र से आता है, तो क्षेत्र के सामान्य वनस्पतियों को बाधित करने के लिए एंटीबायोटिक दवाओं के अतिरिक्त की सिफारिश की जाती है।.

श्वसन नमूनों के लिए उदाहरण जहां जीनस के बैक्टीरिया की उपस्थिति पर संदेह है हेमोफिलस Bacitracin का उपयोग विकास को बाधित करने के लिए किया जाता है स्टैफिलोकोकस, माइक्रोकॉकस, स्ट्रेप्टोकोकस और सैप्रोफाइटिक निसेरिया.

जननांग के नमूने के मामले में, जहां यह संदिग्ध है हीमोफिलस डुकेरी, निम्नलिखित तरीके से तैयार एक चॉकलेट अगर का सफलतापूर्वक उपयोग किया गया है: 5% चॉकलेट घोड़े के खून के साथ म्यूलर-हिंटन अगर, 1% आइसोवेटालेक्स संवर्धन और 3 μg / एमएल वैनकोमाइसिन.

चॉकलेट एगर थायर मार्टिन अगर के साथ तैयार

के अलगाव के लिए यह माध्यम विशेष है निसेरिया गोनोरिया. इसके साथ वनस्पतियों को बाधित करने के लिए एंटीबायोटिक्स होना चाहिए। मेमने के खून का इस्तेमाल किया जाता है.

तैयारी

उपयोग किए जाने वाले आधार अगर की तैयारी के संकेत को देखा जाना चाहिए। वे निर्जलित माध्यम के पैकेज के पीछे हैं। वे आम तौर पर वर्णन करते हैं कि एक लीटर संस्कृति माध्यम तैयार करने के लिए कितना तौला जाना चाहिए.

प्रयोगशाला में आप आवश्यक सटीक मात्रा तैयार कर सकते हैं, यह एक लीटर से अधिक या कम हो सकता है.

गणना

तीन का नियम यह गणना करने के लिए बनाया गया है कि वांछित मात्रा को तैयार करने के लिए कितना तौला जाना चाहिए। उदाहरण:

यदि 1 लीटर के लिए 40 ग्राम वजन आवश्यक है और प्रयोगशाला में 800 मिलीलीटर की आवश्यकता होती है, तो यह कहा जाता है:

1000 मिली -40 जीआर

800 मिली - एक्स

सूत्र इस प्रकार होगा:

एक्स = 32 जीआर (800 मिलीलीटर के लिए वजन करने के लिए राशि).

वज़न और भंग

हम आवश्यक मात्रा में वजन करते हैं और इसे पानी के साथ एक फिला में डालते हैं.

मध्यम आँच पर गर्म करें और धीरे-धीरे रोटरी आंदोलनों के साथ मिलाएं जब तक कि निर्जलित माध्यम पूरी तरह से भंग न हो जाए, इसे 1 मिनट के लिए उबालने के लिए छोड़ दें।.

बाँझ बनाना

Fiola को 20 मिनट के लिए 121 ° C पर मध्यम बाँझ करने के लिए आटोक्लेव में पेश किया जाता है.

रक्त का एकत्रीकरण

आटोक्लेव छोड़ते समय इसे तब तक आराम करने के लिए छोड़ दिया जाता है जब तक माध्यम का तापमान रक्त रखने के लिए लगभग 56 से 70 ° C के बीच न हो जाए और तब तक मिलाएं जब तक कि माध्यम भूरा न हो जाए।.

यदि आप सप्लीमेंट्स जोड़ने जा रहे हैं, तो इसे करने का समय है। बाद में प्रत्येक बाँझ पेट्री डिश में 20 मिलीलीटर मिलाएं और परोसें.

पूरी प्रक्रिया एक लामिना का प्रवाह हुड में या बन्सेन बर्नर के आसपास किया जाना चाहिए.

जब तक वे जम न जाएं और फ्रिज में उलटे रखें.

खून का उपयोग किए बिना चॉकलेट अगर तैयार करने का दूसरा तरीका

आधार माध्यम ऊपर वर्णित के रूप में तैयार किया गया है, व्यावसायिक रूप से प्राप्त निर्जलित हीमोग्लोबिन को भंग कर दिया गया है और आटोक्लेव में निष्फल हो गया है.

दोनों समाधानों को 50 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा करने की अनुमति है, इसमें शामिल हों और पूरक जोड़ें। सड़न रोकनेवाला परिस्थितियों में मिलाएं और फिर बाँझ पेट्री डिश में परोसें.

गुणवत्ता नियंत्रण

यह महत्वपूर्ण है कि रक्त को संकेतित तापमान पर रखा जाता है, क्योंकि यह लाल रक्त कोशिकाओं को ग्रहण करने के लिए आदर्श है और साथ ही थर्मसेंसिव के कारक V को बनाए रखता है।.

अगर की सतह पर बुलबुले नहीं होना चाहिए। 100 प्लेटों के प्रत्येक बैच को स्टोव की जांच करने के लिए 24 घंटे के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर स्टोव में एक या दो प्लेटों को ऊष्मायन किया जाना चाहिए.

सर्वोत्तम परिणामों के लिए, तैयारी के तुरंत बाद चॉकलेट अगर का उपयोग किया जाना चाहिए.

नैदानिक ​​महत्व के सूक्ष्मजीवों के विकास के लिए ताजे तैयार माध्यम की प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए प्रयोगशाला में नियंत्रण जीवाणु उपभेदों को लिया जाना चाहिए.

संदर्भ

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