Voges-Proskauer परीक्षण नींव, तैयारी और उपयोग करता है

Voges-Proskauer परीक्षण एक जैव रासायनिक परीक्षण है जिसका उपयोग परिवार एंटरोबैक्टीरिया से संबंधित बैक्टीरिया की पहचान करने में मदद करने के लिए किया जाता है। विशेष रूप से यह उपभेदों को अलग करने के लिए उपयोगी है एस्केरिचिया कोलाई की क्लेबसिएला और एंटरोबैक्टर, दूसरों के बीच में.

परीक्षण लिक्विड कल्चर माध्यम में किया जाता है, जिसे मिथाइल रेड-वोग्स प्रॉस्क्यूअर कहा जाता है, जिसे परिचित आरएम / वीपी द्वारा बेहतर रूप से जाना जाता है। यह माध्यम बफर पॉलीपेप्टोन, ग्लूकोज, डिपोटेशियम फॉस्फेट और आसुत जल से बना है.

वर्तमान RM / VP माध्यम क्लार्क और Lubs माध्यम का एक संशोधन है, जिसमें मूल रूप से पेप्टोन और ग्लूकोज की कम सांद्रता होती है। इसलिए, कम हाइड्रोजन आयन का उत्पादन किया गया था, जो सकारात्मक वोग्स-प्रोस्कोर की प्रतिक्रिया के लिए आवश्यक था.

परीक्षण ब्यूटाइलीन ग्लाइकॉल मार्ग के माध्यम से ग्लूकोज का उपयोग करने के लिए सूक्ष्मजीव की क्षमता पर आधारित है, और ऑक्सीजन और एक क्षारीय पीएच की उपस्थिति में एसीटोन नामक एक तटस्थ अंत उत्पाद बनाता है।.

RM / VP माध्यम में, Voges-Proskauer परीक्षण प्रकट करने में सक्षम होने के अलावा, मिथाइल लाल परीक्षण भी प्रकट किया जा सकता है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 वोग्स-प्रॉस्क्यूअर परीक्षण का आधार
  • 1.2 परीक्षण और व्याख्या के विकास के लिए आधार
• 2 तैयारी
  • 2.1 मध्यम आरएम / वीपी
  • २.२ वोग्स ए रिएजेंट
  • 2.3 वोग्स बी रिएजेंट
• 3 वोग्स-प्रॉस्क्यूअर टेस्ट की प्रक्रिया
  • 3.1 परीक्षण का विकास
• 4 का उपयोग करें
• 5 गुणवत्ता नियंत्रण
• 6 संदर्भ

आधार

Voges-Proskauer परीक्षण का आधार

माध्यम में मौजूद प्लुरिप्प्टन बैक्टीरिया की वृद्धि के लिए आवश्यक पोषण संबंधी आवश्यकताएं प्रदान करते हैं। इसके भाग के लिए, ग्लूकोज मुख्य यौगिक है। कई बैक्टीरिया ग्लूकोज को मेटाबोलाइज करने और पाइरुविक एसिड बनाने की क्षमता रखते हैं.

पाइरुविक अम्ल ग्लूकोज के चयापचय में एक मध्य बिंदु है और वहाँ से प्रत्येक सूक्ष्मजीव विभिन्न मार्गों को ले सकता है। कुछ मिश्रित अम्लों का निर्माण करेंगे, जैसे लैक्टिक एसिड, एसिटिक एसिड, फार्मिक एसिड और स्यूसिनिक एसिड और अन्य तटस्थ उत्पाद बनाएंगे जैसे 2,3-ब्यूएनेडिओल.

Voges-Proskauer परीक्षण सूक्ष्मजीवों को एसिटाइल मिथाइल कारबिनोल (एसीटोन) बनाने की क्षमता का पता चलता है, एरोबिक स्थितियों के तहत 2,3-ब्यूएनेडिओल का एक मध्यवर्ती उत्पाद.

एसीटोन कम हो जाता है और 2,3-बुटानाडियोल बनाता है, लेकिन यह प्रतिक्रिया प्रतिवर्ती है, इसलिए यदि 2,3-बुटानाडियोल ऑक्सीकरण होता है, तो एसीटोन बनता है। इसलिए, ऑक्सीजन आवश्यक है.

डिपोटेशियम फॉस्फेट बफर है जो मिश्रण को 6.9 is 0.2 के पीएच पर नम करता है।.

परीक्षण और व्याख्या के विकास के लिए आधार

प्रतिक्रिया प्रदर्शित करने के लिए, वोग्स ए और वोग्स बी के रूप में जाना जाने वाले दो अभिकर्मकों (बैरिट अभिकर्मकों) का उपयोग करके एक विकास किया जाना चाहिए।.

Voges A, α-naphthol का 5% घोल है, और Voges B 40% पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड तैयारी है। यदि पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड उपलब्ध नहीं है, तो इसे 40% सोडियम हाइड्रॉक्साइड द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है.

Th-नेफथोल एक उत्प्रेरक है जो प्रतिक्रिया के रंग की तीव्रता को बढ़ाएगा, जो परीक्षण को अधिक संवेदनशील बनाता है। Α-naphthol को हमेशा सबसे पहले जोड़ा जाना चाहिए, जिससे ट्यूब में हलचल होती है ताकि माध्यम ऑक्सीजन के संपर्क में आए। इस तरह से मौजूद एसीटोन को डायसेटाइल में ऑक्सीकृत किया जाता है, और 2,3-बुटानडियोल को एसीटोन बनाने के लिए ऑक्सीकरण किया जाता है, इसे डायसेटाइल को पास करते हुए।.

यह कैसे α-naphthol diacetyl के लिए बाध्य करेगा, जो बदले में अमीनो एसिड आर्जिनिन में मौजूद गुआनिडाइन नाभिक से जुड़ा हुआ है, उत्तरार्द्ध प्लिपरिप्टनस से आ रहा है.

इसके भाग के लिए, सीओ को अवशोषित करने के लिए पोटेशियम या सोडियम हाइड्रोक्साइड जिम्मेदार है₂ और पेप्टोन के साथ प्रतिक्रिया करते हैं। यह प्रतिक्रिया गुलाबी-सैल्मन रंग के गठन का कारण बनती है, ट्यूब को अच्छी तरह से हिलाने के बाद स्पष्ट रूप से दिखाई देती है.

रंगाई तुरंत होने के लिए, डाइसेटाइल, पेप्टोन और α-naphthol की सही मात्रा मिलाई जानी चाहिए। यदि ऐसा नहीं होता है, तो व्याख्या करने से पहले ट्यूब को 15 मिनट के लिए आराम करने दें.

आमतौर पर परीक्षण 2 से 5 मिनट के बाद सकारात्मक होता है, जब एक कमजोर गुलाबी रंग देखा जा सकता है। यदि 30 मिनट से 1 घंटे के लिए आराम पर छोड़ दिया जाए तो रंग की तीव्रता अधिकतम होगी (गहरा लाल).

शोरबा के पीले होने पर एक नकारात्मक परीक्षण स्पष्ट होगा। 1 घंटे के बाद, यदि परीक्षण नकारात्मक है, तो α-naphthol पर पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड की प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप एक तांबे का रंग बन सकता है.

तैयारी

मध्यम आरएम / वीपी

निर्जलित संस्कृति के माध्यम के 17 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग। 5 मिनट तक खड़े रहने दें। पूरी तरह से घुलने के लिए उबलने तक गरम करें। ट्यूबों में 3 से 4 मिलीलीटर की सेवा और 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर आटोक्लेव में बाँझ.

निर्जलित संस्कृति का माध्यम बेज है और तैयार किया गया माध्यम हल्का एम्बर है.

माध्यम का अंतिम पीएच 6.9 pH 0.2 है.

वोग्स ए रीजेंट

Α-naphthol का 5 ग्राम वजन और एथिल अल्कोहल (निरपेक्ष) के 50 मिलीलीटर में भंग। बाद में 100 मिलीलीटर तक एथिल अल्कोहल जोड़ना जारी रखें.

अभिकर्मक वोग्स बी

पोटेशियम हाइड्रॉक्साइड का 40 ग्राम वजन और बीकर में आसुत जल के 50 मिलीलीटर में भंग। तापमान को नियंत्रित करने के लिए ग्लास को ठंडे पानी के स्नान में रखा जाना चाहिए, क्योंकि विघटन के समय तैयारी तेज हो जाती है.

समाधान ठंडा होने के बाद, इसे एक स्नातक गुब्बारे में स्थानांतरित किया जाता है और आसुत जल के साथ 100 एमएल तक लाया जाता है.

Voges-Proskauer परीक्षण की प्रक्रिया

Voges-Proskauer परीक्षण करने के लिए, एक RM / VP शोरबा अध्ययन के तहत सूक्ष्मजीव के साथ inoculated है, 18 से 24 घंटे की शुद्ध संस्कृति से.

इनोकुलम बहुत घना नहीं होना चाहिए। यह 24 से 48 घंटों के लिए 35-37 डिग्री सेल्सियस पर ऊष्मायन किया जाता है, हालांकि कभी-कभी कई दिनों तक ऊष्मायन आवश्यक होता है। कोवान और स्टील का मानना ​​है कि परिवार के सभी पॉजिटिव वोग्स-प्रोसक्युर (वीपी) प्रजातियों का पता लगाने के लिए 5 दिन न्यूनतम ऊष्मायन समय है।.

परीक्षण का विकास

एक ट्यूब में 1 एमएल विभाज्य को अलग करें और निम्नानुसार विकास करें: वोग्स की 12 बूंदें (0.6 एमएल) एक अभिकर्मक और वोग्स बी की 4 बूंदें (0.2 एमएल) को मिलाएं। प्रदर्शन करने से पहले 5 से 10 मिनट तक। हालांकि, यदि परीक्षण अभी भी नकारात्मक है, तो इसे 30 मिनट से 1 घंटे के बाद ट्यूब को खड़े होने और निरीक्षण करने दें.

गुलाबी-लाल रंग की उपस्थिति इंगित करती है कि वोग्स-प्रोस्कोर की प्रतिक्रिया सकारात्मक है। यदि माध्यम पीला रहता है, तो प्रतिक्रिया नकारात्मक है.

झूठे नकारात्मक से बचने के लिए आदेश और मात्रा में डेवलपर्स के अलावा आवश्यक है.

उपयोग

वोग्स-प्रॉस्क्यूअर परीक्षण तनाव के बीच अंतर करने के लिए उपयोगी है ई। कोलाई जो VP नकारात्मक हैं, जेनेरा क्लेबसिएला, एंटरोबैक्टीरिया, सेराटिया, दूसरों के बीच में, जो VP पॉजिटिव हैं.

गुणवत्ता नियंत्रण

तैयार किए गए माध्यम की गुणवत्ता का परीक्षण करने के लिए नियंत्रण उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है। एस्केरिचिया कोलाई एटीसीसी 25922, क्लेबसिएला निमोनिया एटीसीसी 700603, प्रोटीन मिराबिलिस एटीसीसी 43071, साल्मोनेला टाइफिमुरियम और एंटरोबैक्टीरिया क्लोकै एटीसीसी 13047.

अपेक्षित परिणाम केवल के लिए सकारात्मक वोग्स-प्रॉस्क्यूएर प्रतिक्रियाएं हैं के। निमोनिया और ई। क्लोके. बाकी नकारात्मक प्रतिक्रिया देते हैं.

संदर्भ

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