MIO मध्यम नींव, तैयारी और उपयोग करता है

आधा MIO एक जैव रासायनिक परीक्षण है जिसका उपयोग परिवार एंटरोबैक्टीरिया से संबंधित बैक्टीरिया की प्रजातियों की पहचान में मदद करने के लिए किया जाता है। यह काफी पौष्टिक है और इसमें ग्लूकोज, यीस्ट एक्सट्रैक्ट, पेप्टोन, ट्रिप्टीन, एल-ऑर्निथिन हाइड्रोक्लोराइड, ब्रोमोकेरसोल बैंगनी और अगर शामिल हैं.

इसके संक्षिप्त अर्थ (MIO) में से प्रत्येक का वर्णन है जो इस माध्यम में देखा जा सकता है; गतिशीलता, इंडोल और ऑर्निथिन। प्रेरणा फ्लैगेल्ला की उपस्थिति से सूक्ष्मजीव की गति की क्षमता है। इस संपत्ति को देखने के लिए, मध्यम की स्थिरता अर्ध-ठोस होनी चाहिए, इसलिए तैयारी में कम मात्रा में अगर है।.

इंडोल उत्पादन ट्रिप्टोफैनस एंजाइम की उपस्थिति का सबूत देता है जो अमीनो एसिड ट्रिप्टोफैन पर कार्य करता है, जो कि इंडोल उत्पादन को दृश्यमान बनाने के लिए एक खुलासा अभिकर्मक के उपयोग के लिए आवश्यक है।.

अंत में, ओर्निथिन यह निर्धारित करता है कि क्या जीवाणु अमीनो एसिड को डीकार्बाक्सिलेट करने में सक्षम है, अर्थात, यदि उसमें एंजाइम ओरिनिथिन डिकार्बॉक्साइलेज है.

सूची

• 1 फाउंडेशन
  • 1.1 पेप्टोन, खमीर निकालने और ट्रिप्टिन
  • 1.2 मोटापन
  • 1.3 ग्लूकोज
  • 1.4 एल-ऑर्निथिन
  • 1.5 पीएच संकेतक
• 2 सीडिंग और विकास तकनीक
• 3 तैयारी
  • ३.१ MIO माध्यम
  • 3.2 कोवाक्स अभिकर्मक (इंडोल परीक्षण डेवलपर)
• 4 का उपयोग करें
• 5 गुणवत्ता नियंत्रण
• 6 संदर्भ

आधार

पेप्टोन, खमीर निकालने और ट्रिप्टीन

ये तत्व इस माध्यम की पोषक शक्ति में योगदान करते हैं। वे बैक्टीरिया के विकास के लिए पोषक तत्वों और आवश्यक अमीनो एसिड के स्रोत के रूप में काम करते हैं.

इसके अलावा, triptein एंजाइम ट्रिप्टोफैनस की उपस्थिति का प्रमाण देने के लिए ट्रिप्टोफैन का एक स्रोत है, जो इंडिपोल, पाइरुविक एसिड, अमोनिया और ऊर्जा को रिड्यूसिव डिमैटेशन द्वारा ट्रिप्टोफैन को नीचा करता है।.

इंडोल रंगहीन है, इसलिए इसकी उपस्थिति का पता एर्लिच या कोवाक्स अभिकर्मक की पांच बूंदों को जोड़कर लगाया जाता है, दोनों पी-डाइमिथाइलिनोबेंज़ाल्डिहाइड.

इस यौगिक का एल्डिहाइड समूह इण्डोल के साथ अभिक्रिया करता है, जिससे अग्र सतह पर एक अंगूठी के आकार का फ्यूशिया-लाल उत्पाद बनता है।.

रंग के किसी भी निशान को सकारात्मक सबूत के रूप में माना जाना चाहिए। परीक्षण को तुरंत पढ़ा जाना चाहिए, क्योंकि थोड़ी देर के बाद रंग खराब हो जाता है.

दूसरी ओर, ऑर्निथिन की गतिशीलता और डिकार्बोलाइजेशन के परिणामों को दर्ज करने के बाद इस परीक्षण का खुलासा किया जाना चाहिए।.

व्याख्या

सकारात्मक परीक्षण: कोवाक्स अभिकर्मक बूंदों को जोड़ने पर एक फ्यूशिया लाल अंगूठी का गठन.

नकारात्मक परीक्षण: कोई रिंग गठन नहीं है.

गतिशीलता

यदि जीवाणुरहित माध्यम का अवलोकन किया जाता है या वृद्धि की एक मोटी रेखा होती है जो प्रारंभिक टीका के चारों ओर फैलती है तो बैक्टीरिया को स्थानांतरित करने की क्षमता का सबूत होगा।.

एक नकारात्मक गतिशीलता परीक्षण विकास की एक पतली रेखा का निरीक्षण करके निकाला जाएगा, और चारों ओर विकास के बिना होगा.

यह महत्वपूर्ण है कि इंडोल को प्रकट करने से पहले गतिशीलता को पढ़ा जाता है, क्योंकि अभिकर्मक बादलों के पूरे माध्यम को जोड़ देता है.

मोबाइल में लेकिन धीमी गति से बढ़ने वाले बैक्टीरिया में इस माध्यम के साथ अपनी गतिशीलता को प्रदर्शित करना मुश्किल है। इस मामले में अन्य परीक्षणों या विधियों का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है, जैसे कि प्रेरणा माध्यम या ड्रॉप ड्रॉप विधि.

शर्करा

ग्लूकोज किण्वित कार्बोहाइड्रेट है, जो ऊर्जा को अम्लीय रूप प्रदान करने के अलावा, अमीनो एसिड ऑर्निथिन के डिकार्बोजाइलेशन के लिए एक आवश्यक स्थिति उत्पन्न करता है।.

ग्लूकोज का किण्वन हमेशा होना चाहिए, इस सिद्धांत के आधार पर कि सभी बैक्टीरिया एंटरोबैक्टीरिया किण्वन ग्लूकोज से संबंधित हैं.

एल ओर्निथिन

यदि जीवाणु एंजाइम ओर्निथिन डेकार्बोक्सिलेस एंजाइम का उत्पादन करता है, तो यह एक बार ग्लूकोज के फेर से अम्लीय हो जाने पर कार्य कर सकता है।.

एंजाइम ओर्निथिन डिकार्बोक्साइलेज़ एमिनो एसिड के कार्बोक्सिल समूह पर काम करता है, जो पोटीन नामक एक एमाइन का उत्पादन करता है जो माध्यम को फिर से क्षारीय करता है।.

इस परीक्षण को ऊष्मायन के 24 घंटों के बाद पढ़ा जाना चाहिए, क्योंकि यदि आप झूठी नकारात्मक के साथ परीक्षण को गलत तरीके से समझने से पहले पढ़ने की कोशिश करते हैं.

यह याद रखना चाहिए कि जो पहली प्रतिक्रिया होती है वह ग्लूकोज का किण्वन है, जिससे कि मध्यम प्रारंभिक चरण में पीला हो जाता है (पहले 10 से 12 घंटे)। यदि बाद में ओर्निथिन का डीकार्बाक्सिलेशन होता है, तो माध्यम बैंगनी हो जाएगा.

इंडोल को दर्शाने से पहले ऑर्निथिन डिकार्बोलाइजेशन टेस्ट की व्याख्या करना महत्वपूर्ण है, क्योंकि कोवाक्स अभिकर्मक माध्यम के रंग को संशोधित करता है.

व्याख्या

नकारात्मक परीक्षण: मध्यम पीले या पीले रंग की पृष्ठभूमि के साथ.

सकारात्मक परीक्षण: पूरी तरह से बैंगनी.

PH संकेतक

इस मामले में ब्रोमोकेरसोल बैंगनी का उपयोग किया जाता है; बीच में पीएच परिवर्तन होने पर खुलासा करने का प्रभारी व्यक्ति। जब अम्लीकृत होता है, तो संकेतक पीला हो जाता है, और जब अल्कलीकृत बैंगनी हो जाता है.

बीज और विकास तकनीक

MIO माध्यम को लगाने के लिए, एक सीधी लूप या सुई का उपयोग किया जाता है और इसके साथ कॉलोनी के एक हिस्से का अध्ययन किया जाता है।.

MIO माध्यम में एक सीधी रेखा में एक गहरा पंचर बनाया जाता है। डबल पंचर करने की सलाह नहीं दी जाती है, क्योंकि यह एक गलत प्रेरणा छवि दे सकता है यदि पंचर एक ही स्थान पर नहीं किए जाते हैं.

एरोबायोसिस में 37 डिग्री सेल्सियस पर 24 से 48 घंटों के लिए सेते हैं। इस क्रम में परिणामों को ध्यान से देखें: गतिशीलता, ऑर्निथिन के डिकार्बोजाइलेशन और अंत में इंडोल को प्रकट करते हैं.

यह उचित रूप से 2 मिलीलीटर के माध्यम से लेने की सलाह दी जाती है, इसे एक बाँझ ट्यूब में स्थानांतरित करें और वहां इंडोल परीक्षण करें, ताकि अगर नकारात्मक हो, तो मूल ट्यूब के बाकी हिस्सों को 24 घंटों के लिए ऊष्मायन किया जा सकता है, फिर से इण्डोल को प्रकट करने के लिए.

इंडोल का विकास निम्नलिखित तरीके से किया जाता है: कोवाक्स अभिकर्मक की 3 से 5 बूंदों को एमआईओ माध्यम में जोड़ा जाता है और सख्ती से हिलाया जाता है। यह देखा जाता है कि फुकिया लाल अंगूठी दिखाई देती है या नहीं.

तैयारी

आधा MIO

MIO माध्यम के 31 ग्राम वजन और आसुत जल के एक लीटर में भंग.

जब तक मिश्रण पूरी तरह से भंग न हो जाए, तब तक एक मिनट के लिए उबलने तक गर्म करें। कपास के ढक्कन के साथ 13/100 परीक्षण ट्यूबों में मध्यम के 4 मिलीलीटर वितरित करें.

15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ। आटोक्लेव से निकालें और इसे एक रैक में सीधे खड़े होने दें, इस तरह से एक अर्ध ठोस ब्लॉक बनता है.

एक रेफ्रिजरेटर में स्टोर करें 2-8 डिग्री सेल्सियस। बैक्टीरियल स्ट्रेन को लगाने से पहले संयम रखने की अनुमति दें.

निर्जलित माध्यम का रंग बेज रंग का होता है और यह माध्यम थोड़ा बैंगनी रंग का होता है.

तैयार माध्यम का अंतिम पीएच 6.5 pH 0.2 है

मध्यम अम्लीय पीएच के साथ पीला हो जाता है और क्षारीय पीएच में बैंगनी होता है.

कोवाक्स अभिकर्मक (इंडोल परीक्षण डेवलपर)

यह अभिकर्मक इस प्रकार तैयार किया गया है:

150 मिलीलीटर अमाइल, आइसोमाइल या ब्यूटाइल अल्कोहल (तीनों में से कोई भी) मापा जाता है। इसमें 10 ग्राम पी-डाइमिथाइलिनोबेंज़ाल्डिहाइड घुल जाता है। बाद में 50 मिलीलीटर सांद्र हाइड्रोक्लोरिक एसिड को धीरे-धीरे जोड़ा जाता है.

तैयार किया गया अभिकर्मक रंगहीन या हल्का पीला होता है। इसे एक एम्बर बोतल में संग्रहीत किया जाना चाहिए और एक रेफ्रिजरेटर में रखा जाना चाहिए। गहरे भूरे रंग का रंग इसके बिगड़ने को दर्शाता है.

इसके अलावा कोवाक्स अभिकर्मक को एर्लिच अभिकर्मक द्वारा प्रतिस्थापित किया जा सकता है। उत्तरार्द्ध, अधिक संवेदनशील होने के कारण, बैक्टीरिया में इंडोल को प्रकट करना पसंद किया जाता है जो इसे न्यूनतम मात्रा में पैदा करते हैं, जैसा कि कुछ ग्राम नकारात्मक गैर-किण्वन बेसिली और कुछ निश्चित एनारोब में होता है.

उपयोग

यह माध्यम एक ऐसा परीक्षण है जो परिवार में एंटोबैक्टीरिया से संबंधित बैक्टीरिया की पहचान के लिए जैव रासायनिक परीक्षणों की एक बैटरी का पूरक है.

ऑर्निथिन का डी-कार्बोक्सिलेशन डेटा अंतर करने के लिए कार्य करता है शिगेला सोनैनी, यह सकारात्मक देता है, में शिगेला बॉयडी, शिगेला फ्लेक्सनेरी और एस। पेचिशिया, कि नकारात्मक देते हैं.

यह जीनस क्लेबसिएला को भी अलग करता है, जो नकारात्मक देता है, जीनस एंटरोबैक्टर, जहां इसकी अधिकांश प्रजातियां सकारात्मक हैं.

गुणवत्ता नियंत्रण

हर बार MIO माध्यम का एक बैच तैयार किया जाता है, एक नियंत्रण परीक्षण किया जा सकता है। इसके लिए, ज्ञात या प्रमाणित उपभेदों का उपयोग माध्यम के व्यवहार का निरीक्षण करने के लिए किया जाता है.

उपयोग किए जा सकने वाले उपभेद हैं एस्चेरिचिया कोलाई, मॉर्गनैला मॉर्गनी, क्लेबसिएला न्यूमोनिया, एंटरोबैक्टर एरोजेन और प्रोटीन मिराबिलिस.

अपेक्षित परिणाम हैं ई। कोलाई और एम। मोरगनी. दान M: +, I: + और O: +.

क्लेबसिएला निमोनिया सभी ऋणात्मक (M: -, I: -, O :-). प्रोटीन मिराबिलिस और एंटरोबैक्टर एरोजेन दान एम: + मैं: - और ओ: +.

संदर्भ

1. मैक फडदिन जे (2003)। नैदानिक ​​महत्व के बैक्टीरिया की पहचान के लिए जैव रासायनिक परीक्षण। तीसरा संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना। ब्यूनस आयर्स अर्जेंटीना.
2. फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए (2009)। बेली एंड स्कॉट का माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 12 एड। संपादकीय पानामेरिकाना एस.ए. अर्जेंटीना.
3. कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 5 वां संस्करण। संपादकीय पानामेरिकाना एस.ए. अर्जेंटीना.
4. प्रयोगशालाओं ब्रिटानिया। MIO मेडियो 2015: उपलब्ध: britanialab.com
5. बीडी प्रयोगशालाओं BBL मोटेलिटी इंडोल ऑर्निथिन (MIO) मीडियम। 2007. पर उपलब्ध: bd.com
6. वेलटेक लेबोरेटरीज मध्यम एम.आई.ओ. मोटीलिटी, इंडोल, ऑर्निथिन। 2010. पर उपलब्ध: andinamedica.com