आगर रक्त नींव, उपयोग और तैयारी

रक्त अगर यह एक समृद्ध ठोस माध्यम, अंतर है लेकिन चयनात्मक नहीं है। इसका उपयोग नैदानिक ​​नमूनों या उपसंस्कृतियों से सूक्ष्मजीवों की एक विशाल विविधता की वसूली और वृद्धि के लिए किया जाता है.

प्रयोगशाला में प्राप्त अधिकांश नैदानिक ​​नमूनों के बीजारोपण के लिए क्लासिक रक्त अगर को शामिल किया जाना चाहिए; स्टूल नमूनों को छोड़कर जहां यह उपयोगी नहीं है, जब तक कि कुछ संशोधनों के साथ तैयार नहीं किया जाता है.

यह संस्कृति माध्यम मूल रूप से एक समृद्ध आधार अगर और 5% रक्त से बना है। अगर का आधार जरूरतों के हिसाब से अलग-अलग हो सकता है, लेकिन मुख्य रूप से पेप्टोन, अमीनो एसिड, विटामिन, मांस के अर्क, सोडियम क्लोराइड, अगर, अन्य से बना होगा।.

रक्त के लिए, आमतौर पर जानवरों, जैसे भेड़, खरगोश या घोड़े से रक्त प्राप्त करने के लिए बायोटेरियम के संपर्क में होना आवश्यक है। हालांकि, यह हमेशा संभव नहीं होता है और कभी-कभी मानव रक्त का उपयोग किया जाता है.

रक्त अगर माध्यम को प्रयोगशाला में तैयार किया जा सकता है या इसे समर्पित कंपनियों के लिए तैयार किया जा सकता है। इस माध्यम की तैयारी सबसे नाजुक में से एक है, इसकी तैयारी में किसी भी लापरवाही के परिणामस्वरूप दूषित बैच होगा.

इसीलिए हर संभव सावधानी बरती जानी चाहिए और अंत में तैयार किए जाने वाले प्रत्येक 100 के लिए 37 ° C 1 प्लेट में एक गुणवत्ता नियंत्रण को इनक्यूबेट करना चाहिए।.

सूची

• 1 फाउंडेशन
• 2 का उपयोग करता है
  • 2.1 रक्त प्रकार की पसंद
  • 2.2 आधार अगर प्रकार की पसंद
  • 2.3 इसकी तैयारी के लिए इस्तेमाल किए गए आधार माध्यम के अनुसार रक्त अगर का उपयोग
• 3 तैयारी
  • 3.1 वजन और भंग
  • ३.२ बाँझ बनाना
  • 3.3 रक्त का एकत्रीकरण
  • 3.4 पेट्री डिश में डालो
• 4 संदर्भ

आधार

यह पहले ही उल्लेख किया गया है कि रक्त अगर में समृद्ध, विभेदक और गैर-चयनात्मक माध्यम होने की विशेषता है। इन गुणों में से प्रत्येक के तहखाने को नीचे समझाया गया है.

रक्त अगर एक मुख्य आधार के रूप में 5 -10% रक्त है, क्योंकि यह एक समृद्ध माध्यम है। दोनों यौगिकों में कई पोषक तत्व होते हैं और यह गुण अधिकांश कृषि योग्य बैक्टीरिया को इसमें विकसित करने की अनुमति देता है.

यह वृद्धि प्रतिबंध के बिना होती है; इस कारण से यह गैर-चयनात्मक है। हालांकि, अगर इस माध्यम में यौगिक जोड़े जाते हैं जो कुछ सूक्ष्मजीवों के विकास को रोकते हैं और दूसरों के विकास का पक्ष लेते हैं, तो यह चयनात्मक हो जाता है। यह मामला है अगर कुछ प्रकार के एंटीबायोटिक या एंटीफंगल होते हैं.

इसी तरह, रक्त अगार एक अंतर माध्यम है, क्योंकि यह 3 प्रकार के जीवाणुओं को भेद करने की अनुमति देता है: बीटा-हेमोलिटिक, अल्फा-हेमोलिटिक और गामा-हेमोलिटिक।.

बीटा-हेमोलिटिक्स वे हैं जो कॉलोनियों के चारों ओर एक स्पष्ट प्रभामंडल बनाने या पूरी तरह से लाल रक्त कोशिकाओं को तोड़ने की क्षमता रखते हैं, इस प्रकार ß या ol हेमोलिसिस पैदा करते हैं - हेमोलिसिस और सूक्ष्मजीवों को ß-hemolytic कहा जाता है।.

Ples-हेमोलाइटिक बैक्टीरिया के उदाहरण हैं स्ट्रेप्टोकोकस पाइोजेन्स और स्ट्रेप्टोकोकस एग्लैक्टिया.

अल्फा-हेमोलिटिक्स वे हैं जो आंशिक हेमोलिसिस करते हैं, जहां हीमोग्लोबिन को मेथेमोग्लोबिन के लिए ऑक्सीकरण किया जाता है, जो कि उपनिवेशों के चारों ओर एक हरा रंग बनाता है। इस घटना को हेमोलिसिस α या α-हेमोलिसिस के रूप में जाना जाता है और बैक्टीरिया को α-hemolytic के रूप में वर्गीकृत किया जाता है.

Α-hemolytic बैक्टीरिया का उदाहरण हैं स्ट्रेप्टोकोकस निमोनिया और स्ट्रैपटोकोकस समूह का viridans.

अंत में, गामा-हेमोलिटिक या गैर-हेमोलिटिक नामक बैक्टीरिया होते हैं। ये उस पर परिवर्तन उत्पन्न किए बिना अगर पर बढ़ते हैं, एक प्रभाव जिसे ol -हेमोलिसिस के रूप में जाना जाता है, और सूक्ष्मजीव yt -hemolytic हैं.

Of -हेमोलिटिक बैक्टीरिया का उदाहरण: समूह डी के स्ट्रेप्टोकोकस के कुछ उपभेद (स्ट्रेप्टोकोकस बोविस और एंटरोकोकस फेसेलिस).

अनुप्रयोगों

रक्त अगर संस्कृति माध्यम माइक्रोबायोलॉजी प्रयोगशाला में सबसे अधिक उपयोग किया जाता है.

रक्त अगर माध्यम पर बढ़ने में सक्षम सूक्ष्मजीवों में से हैं: सख्त, मुखर, माइक्रोएरोफिलिक, अवायवीय, ग्राम पॉजिटिव या ग्राम-नकारात्मक एरोबिक बैक्टीरिया, तेजी से बढ़ते या धीमी गति से बढ़ने वाले बैक्टीरिया.

कुछ बैक्टीरिया जो पोषण के दृष्टिकोण से मांग कर रहे हैं या परेशान हैं, साथ ही साथ कवक और खमीर भी बढ़ते हैं। इसी तरह, यह उपसंस्कृति या उन उपभेदों को पुन: सक्रिय करने के लिए उपयोगी है जो चयापचय के बहुत कमजोर हैं.

हालांकि, रक्त के प्रकार और आधार की पसंद संभावित सूक्ष्मजीवों के आधार पर अलग-अलग होगी जो कि वसूली के संदेह है और इसका उपयोग पट्टिका (संस्कृति या एंटीबायोग्राम) से बना है।.

रक्त प्रकार की पसंद

रक्त भेड़, खरगोश, घोड़े या मानव हो सकता है.

सबसे अधिक अनुशंसित मेमने का रक्त है, कुछ अपवादों के साथ। उदाहरण के लिए, हीमोफिलस प्रजातियों को अलग करने के लिए, जहां अनुशंसित रक्त घोड़ा या खरगोश है, क्योंकि भेड़ के बच्चे में एंजाइम होते हैं जो कारक V को रोकते हैं.

कम से कम अनुशंसित मानव है, हालांकि यह सबसे अधिक उपयोग किया जाता है, शायद क्योंकि यह प्राप्त करना सबसे आसान है. 

किसी भी प्रकार के एडिटिव और स्वस्थ जानवरों से प्राप्त किए बिना, रक्त को डिफाइब्रिनेट किया जाना चाहिए। मानव रक्त के उपयोग के लिए, कई कारकों को ध्यान में रखना चाहिए:

यदि रक्त उन व्यक्तियों से आता है जिन्हें जीवाणु संक्रमण हुआ है, तो उनके पास विशिष्ट एंटीबॉडी होंगे। इन शर्तों के तहत, कुछ बैक्टीरिया के विकास को बाधित होने की संभावना है.

यदि यह ब्लड बैंक से प्राप्त किया जाता है, तो इसमें साइट्रेट होता है और यह संभव है कि इसकी उपस्थिति में कुछ बैक्टीरिया विकसित न हों। दूसरी ओर, यदि रक्त उन रोगियों से आता है जो एंटीबायोटिक्स ले रहे हैं, तो अतिसंवेदनशील बैक्टीरिया की वृद्धि को रोका जा सकता है.

और अगर रक्त एक मधुमेह व्यक्ति से है, तो अतिरिक्त ग्लूकोज हेमोलिसिस पैटर्न के समुचित विकास में हस्तक्षेप करता है.

आधार अगर प्रकार की पसंद

रक्त अगर की तैयारी के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला आधार एगर बहुत व्यापक हो सकता है। उनमें से हैं: पोषक तत्व अगर, मस्तिष्क ह्रदय जलसेक अगर, ट्राइप्टिसेज़ सोया अगर, म्यूलर हिंटन अगर, थायर मार्टिन अगर, कोलंबिया अगार, ब्रुसेला अगर, कैंप्लोबेक्टर अगर आदि।.

इसकी तैयारी के लिए उपयोग किए गए आधार माध्यम के अनुसार रक्त अगर का उपयोग

पोषक कृषि

यह आधार कम से कम उपयोग किया जाता है, क्योंकि इस पर मुख्य रूप से गैर-मांग वाले बैक्टीरिया जैसे कि एंटिक बेसिली विकसित होंगे, स्यूडोमोनास सपा, एस। ऑरियस, बेसिलस एसपी, दूसरों के बीच में। स्ट्रेप्टोकोकस को अलग करने की अनुशंसा नहीं की जाती है.

हार्ट ब्रेन इन्फ्यूजन आगर (BHI)

यह रक्त अगर के आधार के रूप में सबसे अधिक उपयोग में से एक है, क्योंकि इसमें अधिकांश जीवाणुओं के विकास के लिए आवश्यक पोषक तत्व शामिल हैं स्ट्रेप्टोकोकस सपा और अन्य मांग वाले बैक्टीरिया। यद्यपि यह हेमोलिसिस के पैटर्न का निरीक्षण करना उचित नहीं है.

इस आधार के साथ आम तौर पर मेम्ने के खून का उपयोग किया जाता है.

रक्त अगर वेरिएंट भी तैयार किया जा सकता है, जहां कुछ सूक्ष्मजीवों को अलग करने के लिए अन्य यौगिक जोड़े जाते हैं। उदाहरण के लिए, खरगोश के रक्त, सिस्टीन और ग्लूकोज के साथ पूरक मस्तिष्क दिल जलसेक अगर अलग करने के लिए कार्य करता है फ्रांसिसेला तुलारेंसिस.

जबकि, सिस्टीन टेलराइट के अलगाव के लिए उपयोगी है Corynebacterium diphteriae. आप मानव या मेमने के रक्त का उपयोग कर सकते हैं.

पहले के साथ बीटा-हेमोलिसिस एक संकीर्ण प्रभामंडल जैसा दिखेगा, जबकि दूसरे के साथ प्रभामंडल अधिक व्यापक होगा.

इसी तरह, यह आधार बेकीट्रैसिन, कॉर्न स्टार्च, घोड़े के रक्त और अन्य संवर्धन पूरक (IsoVitaleX) के साथ मिलकर जीन के अलगाव के लिए उपयोग किया जाता है हीमोफिलस सपा श्वसन के नमूनों से.

इसके अलावा, अगर आप एंटीबायोटिक दवाओं के संयोजन को जोड़ते हैं - क्लोरैमफेनिकॉल - जेंटामाइसिन या पेनिसिलिन - स्ट्रेप्टोमाइसिन घोड़े के खून के साथ, यह साबुद ग्लूकोज अगर की अधिक उपज के साथ, रोगजनक कवक की मांग के अलगाव के लिए आदर्श है। के अलगाव में यह विशेष रूप से उपयोगी है हिस्टोप्लाज्मा कैप्सुलैटम.

ट्रायप्टिव सोयाबीन

यह आधार हेमोलिसिस के पैटर्न के बेहतर अवलोकन और नैदानिक ​​परीक्षणों जैसे कि ऑप्टोक्वाइन और बैकीट्रैसिन के प्रदर्शन के लिए सबसे अधिक अनुशंसित है। यह क्लासिक रक्त अगर है जो नियमित रूप से उपयोग किया जाता है.

इस आधार के साथ आप के लिए विशेष रक्त अगर तैयार कर सकते हैं Corynebacterium diphteriae, टेल्यूरियम सिस्टीन के साथ और मेमने का खून.

इसी तरह, भेड़ के खून के साथ इस अगार का संयोजन केनामाइसिन-वैनकोमाइसिन एनारोबेस के विकास के लिए आदर्श है, विशेष रूप से Bacteroides सपा.

आगर मूलर हिंटन

रक्त के साथ पूरक इस आधार का उपयोग मांग वाले सूक्ष्मजीवों जैसे कि एंटीबायोग्राम करने के लिए किया जाता है स्ट्रेप्टोकोकस सपा.

यह बैक्टीरिया के अलगाव के लिए भी उपयोगी है लीजियोनेला न्यूमोफिला.

आगर थायर मार्टिन

यह माध्यम रक्त एगार के लिए एक आधार के रूप में आदर्श है जब निसेरिया जीनस पर संदेह होता है, विशेष रूप से निसेरिया मेनिंगिटिडिस, जैसे एन। सूजाक रक्त अग्र पर नहीं बढ़ता है.

यह भी संवेदनशीलता परीक्षण करने के लिए कार्य करता है निसेरिया मेनिंगिटिडिस.

आगर कोलंबिया

खोज के लिए यह आधार गैस्ट्रिक बायोप्सी के नमूनों के बीजारोपण के लिए उत्कृष्ट है हेलिकोबैक्टर पाइलोरी.

अन्य प्रकार के जीवाणुओं के विकास को रोकने के लिए एंटीबायोटिक दवाओं (वैनकोमाइसिन, ट्राइमेथोप्रिम, एम्फोटेरिसिन बी और सेफ़्सुलोडिन) के साथ 7% मेमने के रक्त को मिश्रित करके माध्यम तैयार किया जाता है.

यह वही आधार है जो मानव या भेड़ के बच्चे के रक्त, नालिडिक्लिक एसिड और कोलिस्टिन के साथ पूरक है जो अलग करने में उपयोगी है गार्डनेरेला योनि. यह एक ही सूक्ष्मजीव के एंटीबायोटिक दवाओं के लिए रोगाणुरोधी संवेदनशीलता के मूल्यांकन के लिए भी आदर्श है.

इसके अलावा, इसका उपयोग एनारोबेस की खेती के लिए रक्त अगर की तैयारी के लिए किया जाता है, अमीनोग्लाइकोसाइड और वैनकोमाइसिन को जोड़ने के लिए.

यह आधार हमें हेमोलिसिस के पैटर्न का ठीक से निरीक्षण करने की अनुमति देता है.

ब्रुसेला आगर

विटामिन के के साथ मिलकर रक्त अगर के आधार के रूप में इस्तेमाल किया जाने वाला यह माध्यम एनारोबिक बैक्टीरिया की खेती के लिए आदर्श है। इस मामले में भेड़ के बच्चे के खून का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है.

कैम्पिलोबैक्टर अगर

5% भेड़ के खून और 5 एंटीबायोटिक्स (सेफालोटिन, एम्फोटेरिसिन बी, ट्राइमेथोप्रिम, पॉलीमैक्सीन बी और वैनकोमाइसिन) के साथ पूरक कैम्पीलोबैक्टर अगार, अलग करने के लिए इस्तेमाल किया जाने वाला माध्यम है कैम्पिलोबैक्टर जेजुनी मल के नमूनों में.

तैयारी

प्रत्येक वाणिज्यिक घर पैकेज के पीछे लाता है संस्कृति संस्कृति का एक लीटर तैयार करने के निर्देश। चयनित आधार एगर के अनुसार वांछित मात्रा तैयार करने के लिए संबंधित गणना की जा सकती है.

वज़न और भंग

बेस एगर निर्जलित (पाउडर) आता है, इसलिए इसे पीएच 7.3 में समायोजित आसुत जल में भंग किया जाना चाहिए.

चुने हुए आधार अगर द्वारा इंगित की गई मात्रा को एक तोला में पानी की इसी मात्रा में तौला और भंग किया जाता है, फिर एक मध्यम गर्मी के लिए गरम किया जाता है और घूर्णन आंदोलनों के साथ मिलाया जाता है जब तक कि सभी पाउडर भंग न हो जाए।.

बाँझ बनाना

एक बार भंग, 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर एक आटोक्लेव में बाँझ.

रक्त का एकत्रीकरण

आटोक्लेव से बाहर निकलते समय फियोला को 40 से 50 ° C के बीच के तापमान तक ठंडा होने दें; एक तापमान है जो मानव त्वचा का समर्थन करता है और एक ही समय में अगर अभी तक ठोस नहीं हुआ है.

इसके लिए, फियोला को हाथ से छुआ जाता है और अगर गर्मी सहन करने योग्य होती है, तो यह डीफिब्रिनेटेड रक्त (50 मिली प्रति लीटर अगर) की समान मात्रा को जोड़ने के लिए आदर्श तापमान है। समरूपता के लिए धीरे से मिलाएं.

रक्त के समुच्चय का मार्ग महत्वपूर्ण है, क्योंकि अगर यह तब किया जाता है जब मध्यम बहुत गर्म होता है तो लाल रक्त कोशिकाएं टूट जाएंगी और माध्यम हेमोलिसिस का निरीक्षण नहीं करेगा।.

यदि इसे बहुत ठंडा जोड़ा जाता है, तो गांठ बन जाएगी और बांसुरी को ठीक से बनाने के लिए माध्यम की सतह चिकनी नहीं होगी.

पेट्री डिश में डालो

रक्त को होमोजेनाइजिंग करने के तुरंत बाद बाँझ पेट्री डिश में परोसें। प्रत्येक पेट्री डिश में लगभग 20 मिलीलीटर डाला जाता है। इस प्रक्रिया को एक लामिना का प्रवाह हुड में या बर्नर के पास किया जाता है.

पेट्री डिश में रक्त अगर को परोसते समय, प्लेट की सतह पर कोई हवाई बुलबुले नहीं रहना चाहिए। यदि ऐसा होता है, तो बन्सन बर्नर की लौ जल्दी से उन्हें खत्म करने के लिए प्लेट के ऊपर से गुजरती है।.

प्लेटों को जमने और एक रेफ्रिजरेटर (2-8 डिग्री सेल्सियस) में संग्रहीत करने की अनुमति दी जाती है जब तक कि उपयोग नहीं किया जाता है। रक्त का उपयोग करने से पहले अगर प्लेटों को बोया जाना चाहिए (उन्हें कमरे का तापमान लेने दें).

तैयार प्लेटें लगभग 1 सप्ताह तक चलती हैं.

संदर्भ

1. की खेती के लिए बियोना एम। माइक्रोबायोलॉजिकल स्थितियां हेलिकोबैक्टर पाइलोरी. रेव कर्नल गैस्ट्रोएंटेरोल 2013; 28 (2): 94-99
2. गार्सिया पी, परेडेस एफ, फर्नांडीज डेल बारियो एम। (1994)। व्यावहारिक नैदानिक ​​माइक्रोबायोलॉजी। कैडिज़ विश्वविद्यालय, द्वितीय संस्करण। UCA प्रकाशन सेवा.
3. "अगर खून।" विकिपीडिया, मुक्त विश्वकोश. 10 दिसंबर 2018, 14:55 यूटीसी। 27 दिसंबर 2018, 01: 49 en.wikipedia.org.
4. फोर्ब्स बी, साहम डी, वीसफेल्ड ए (2009)। बेली एंड स्कॉट का माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। 12 एड। अर्जेंटीना। पानामेरिकाना S.A संपादकीय.
5. CEDIVET प्रयोगशाला पशु चिकित्सा निदान केंद्र। ग्वाटेमाला। पर उपलब्ध: trensa.com.
6.  कोनमैन ई, एलन एस, जैंडा डब्ल्यू, श्रेकेनबर्गर पी, विन्न डब्ल्यू (2004)। माइक्रोबायोलॉजिकल निदान। (5 वां संस्करण)। अर्जेंटीना, संपादकीय पानामेरिकाना एस.ए..