बैक्टीरियल स्मीयर विशेषताओं और तैयारी

 जीवाणु धब्बा बैक्टीरिया सूक्ष्मजीवों के निलंबन की एक पतली फिल्म के रूप में एक विस्तार है जो एक पारदर्शी माइक्रोस्कोप के तहत अवलोकन के लिए एक पारदर्शी कांच की प्लेट या स्लाइड पर किया जाता है।.

फिल्म के रूप में विस्तार सूक्ष्मजीवों को जितना संभव हो उतना अलग करने के लिए किया जाता है, क्योंकि यदि वे समूहबद्ध हैं तो अवलोकन स्पष्ट नहीं है.

स्मीयर तैयारी की जीवाणु संस्कृतियों तकनीकों के अध्ययन में, उन्हें बेहतर विश्लेषण करने के लिए निर्धारण और रंगाई का उपयोग किया जाता है। सूक्ष्मजीवों के छोटे आकार के कारण, इसके अवलोकन के लिए एक ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग आवश्यक है.

ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप स्मीयरों के अवलोकन के लिए अपरिहार्य साधन हैं। ये ऑप्टिकल लेंस और प्रकाश का उपयोग करते हैं जो आकार में बड़ी वृद्धि के साथ नमूनों के दृश्य की अनुमति देता है.

सामान्य तौर पर, जीवित कोशिकाओं में ऐसी संरचनाएं नहीं होती हैं जो अधिकतर रंगीन होती हैं, ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप के माध्यम से देखी जाती हैं, वे रंगहीन, पारदर्शी नमूने होते हैं, और उनके आसपास और उनके आसपास बहुत कम आंतरिक विपरीत दिखाते हैं.

सहायक धुंधला तकनीक के उपयोग के बिना सरल प्रकाश क्षेत्र माइक्रोस्कोप के साथ अवलोकन, बहुत सीमित है और केवल कुछ मामलों में उपयोग किया जाता है, जैसा कि सूक्ष्मजीवों के आंदोलन के अवलोकन में होता है।.

सूक्ष्मजीवों को बेहतर ढंग से देखने के लिए, इसके विपरीत और संकल्प के बीच एक संतुलन हासिल करना होगा। कोशिकाओं के विवरण को एक माइक्रोस्कोप के तहत नहीं देखा जा सकता है, यहां तक ​​कि उच्च रिज़ॉल्यूशन पर भी; डाई का उपयोग धुंधला तकनीक के माध्यम से आवश्यक है, जो अवलोकन के लिए विपरीत प्रदान करते हैं.

सूची

• 1 एक अच्छी गुणवत्ता वाले जीवाणु स्मीयर के लक्षण
  • १.१ उत्कृष्ट विपरीत
  • 1.2 अच्छा तय
  • 1.3 अच्छा धुंधला
• 2 तैयारी
  • २.१ ए। फ्रोटिस
  • २.२ बी
  • 2.3 सी। सरल धुंधला
  • 2.4 डी। स्मीयर का निश्चित संरक्षण
• 3 संदर्भ

एक अच्छी गुणवत्ता वाले जीवाणु स्मीयर के लक्षण

उत्कृष्ट विपरीत

एक उत्कृष्ट विपरीत प्राप्त करने के लिए परिष्कृत सूक्ष्मदर्शी कहा जाता है चरण विपरीत माइक्रोस्कोप, अंतर हस्तक्षेप और अंधेरे क्षेत्र माइक्रोस्कोप. इस प्रकार के माइक्रोस्कोप का उपयोग बैक्टीरिया संरचनाओं जैसे म्यान और फिलामेंट्स, अन्य के बीच निरीक्षण करने के लिए किया जाता है.

धुंधला एक विपरीत तकनीक को बढ़ाने के लिए एक सरल तकनीक है जो स्पष्ट क्षेत्र माइक्रोस्कोप के साथ प्राप्त की जाती है। इस तकनीक में, अलग-अलग रंजक का उपयोग किया जा सकता है जो माइक्रोस्कोप के तहत अवलोकन में सुधार करते हैं.

दाग सीधे स्लाइड पर सूक्ष्मजीवों के निलंबन के स्मीयरों या एक्सटेंशन पर बने होते हैं, पहले से सूखे और तय होते हैं.

अच्छा तय है

फिक्सेशन एक तकनीक है जिसका उपयोग सेलुलर संरचनाओं को संरक्षित करने के लिए किया जाता है; सूक्ष्मजीवों की निष्क्रियता और स्लाइड के कांच को आसंजन का कारण बनता है। विभिन्न निर्धारण उपचार हैं: गर्मी निर्धारण और रासायनिक निर्धारण.

हीट फिक्सेशन

यह बैक्टीरिया स्मीयर के अवलोकन में सबसे अधिक उपयोग की जाने वाली विधि है। तकनीक में एक लाइटर की लौ द्वारा स्मीयर के जीवाणु निलंबन को पारित करना शामिल है। यह तकनीक बैक्टीरिया की बाहरी आकृति विज्ञान को संरक्षित करने में सक्षम है, लेकिन उनकी आंतरिक संरचनाओं को नष्ट कर देती है.

रासायनिक निर्धारण

रासायनिक निर्धारण में रसायन का उपयोग किया जाता है, जैसे कि फॉर्मलाडेहाइड या फॉर्मलाडेहाइड, इथेनॉल और एसिटिक एसिड जैसे अन्य। रासायनिक फिक्सिंग एजेंटों का उपयोग करने का लाभ यह है कि सूक्ष्मजीवों के आंतरिक सेलुलर संरचनाओं का संरक्षण प्राप्त किया जाता है.

अच्छा धुंधला

पहले से सूखे और निश्चित स्मीयर को धुंधला करने के लिए सबसे आम प्रक्रियाएं सकारात्मक या सरल धुंधला, अंतर धुंधला और नकारात्मक धुंधला हो जाना हैं। विशेष सेल संरचनाओं (कैप्सूल, बीजाणु, फ्लैगेला) को धुंधला करने के लिए विशेष तकनीकें भी हैं.

सकारात्मक धुंधला या साधारण धुंधला

सकारात्मक या सरल धुंधला सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला दाग धब्बा तकनीक है। रंजक का उपयोग करता है जो कुछ सूक्ष्मजीव संरचनाओं को बांधने की क्षमता रखता है, जिससे उन्हें माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जा सकता है.

इन रंगों की रासायनिक संरचना में क्रोमोफोरिक समूह (रंगीन भाग) होते हैं, बारी-बारी से दोहरे बंधन और सरल बंध (संयुग्मन) होते हैं। ये बॉन्ड कुछ सेलुलर संरचनाओं के साथ आयनिक या सहसंयोजक बॉन्ड स्थापित कर सकते हैं.

सकारात्मक या सरल धुंधला में प्रयुक्त डाई ज्यादातर रासायनिक व्युत्पन्न हैं रंगों का रासायनिक आधार (रंगीन कार्बनिक लवण).

दूसरी ओर, रंगों के बीच हम कुछ मूल पीएच के साथ पा सकते हैं और अन्य एसिड पीएच के साथ.

मूल रंग

बुनियादी रंजक में, क्रोमोफोर समूह में एक सकारात्मक विद्युत आवेश होता है। प्रोकैरियोटिक सूक्ष्मजीवों के विशाल बहुमत में एक तटस्थ आंतरिक पीएच होता है, और उनकी कोशिका की सतह को नकारात्मक रूप से चार्ज किया जाता है। इस इलेक्ट्रोस्टैटिक इंटरैक्शन के माध्यम से, क्रोमोफोर सेल को बांधता है और इसे डाई करता है.

मूल रंगों के उदाहरण मेथिलीन ब्लू, वायलेट क्रिस्टल, मैलाकाइट ग्रीन, बेसिक फ्यूसीन, सफारी, अन्य हैं।.

एसिड डाई

एसिड रंजक में क्रोमोफोर समूह का ऋणात्मक विद्युत आवेश होता है। ये सकारात्मक रूप से चार्ज किए गए अमीनो समूहों के साथ प्रोटीन के धुंधला होने के लिए उपयोग किए जाते हैं। एसिड रंजक के उदाहरण एसिड फ्यूसीन, गुलाब बंगाल, कांगो लाल और ईओसिन हैं.

अंतर धुंधला हो जाना

विभेदक धुंधला की तकनीक में माइक्रोस्कोप के तहत विभिन्न सूक्ष्मजीवों को अलग करने के लिए, अलग-अलग रंग या तीव्रता के दो रंगों को लागू करना शामिल है। ग्राम स्टेन और एसिड-अल्कोहल रेजिस्टेंस स्टेनिंग, बैक्टीरियोलॉजी में सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला अंतर है.

ग्राम दाग का उपयोग सेल की दीवार के प्रकार के अलावा आकार, आकार, कोशिका समूहन को जानने के लिए एक प्रारंभिक परीक्षण के रूप में किया जाता है। ग्राम दाग परीक्षण के माध्यम से, सेल की दीवार वाले बैक्टीरिया को ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरिया और ग्राम-नकारात्मक बैक्टीरिया के रूप में वर्गीकृत किया जाता है.

नकारात्मक धुंधला

इस तकनीक में रासायनिक रंगों का उपयोग किया जाता है जो सेलुलर इंटीरियर में प्रवेश नहीं करते हैं, लेकिन वे ऐसा करते हैं जिसमें सूक्ष्मजीव एक काले रंग की पृष्ठभूमि के रूप में दिखाई देते हैं.

नकारात्मक धुंधला होने की तकनीक में, स्मीयर चीनी स्याही या निग्रोसिन के निलंबन की एक बूंद के साथ बनाया जाता है, जो कमरे के तापमान पर सूखने की अनुमति देने के बाद प्रकाश के पारित होने के लिए एक फिल्म अपारदर्शी बनाता है। इस तरह, सूक्ष्मजीवों को एक अंधेरे पृष्ठभूमि पर उज्ज्वल रूपों के रूप में मनाया जाता है.

तैयारी

A. धब्बा

1.- स्लाइड्स को बहुत अच्छे से धोएं, अब्सॉर्बेंट पेपर से सुखाएं और उन्हें लेबल करें। लेबल को उस व्यक्ति की तैयारी, दिनांक और नाम की सामग्री को इंगित करना चाहिए जिसने इसे संसाधित किया है.

2.- लाइटर को हल्का गर्म करें और लाल गर्म होने तक लौ में इनोक्यूलेशन लूप को स्टरलाइज़ करें.

3.- हैंडल को ठंडा होने दें.

4.- बैक्टीरियल कल्चर की ट्यूब लें, कैप हटाएं और लाइटर की लौ (लौ) के पास ट्यूब के मुंह को जल्दी से पास करें.

5.- जीवाणु संस्कृति वाले ट्यूब के अंदर इनोक्यूलेशन लूप का परिचय दें और नमूना लें.

6.- यदि संस्कृति तरल माध्यम में है, तो स्लाइड के केंद्र में हैंडल के साथ लिया गया नमूना रखें और इसे लगभग 2 सेमी व्यास के घेरे में सावधानी से फैलाएं।.

7.- इनोक्यूलेशन लूप को फिर से स्टरलाइज़ करें.

8.- हवा में धब्बा सूखने दें.

9.- चरण 3 से 8 तीन बार दोहराएं.

10.- यदि संस्कृति ठोस माध्यम में है, तो आसुत जल की एक बूंद को पहले स्लाइड पर रखा जाना चाहिए। यह चरण 2 से 5 के संकेत के अनुसार इनोक्यूलेशन की संभाल के साथ ली गई संस्कृति का एक छोटा सा नमूना मिश्रण करने के लिए किया जाता है (asepsis की स्थिति).

11.- स्लाइड पर पानी की बूंद के साथ पतला नमूना बढ़ाएं और तीन बार दोहराएं.

बी। निर्धारण

1.- शुष्क स्मीयरों को तरल माध्यम में संस्कृतियों से जोड़ा गया-, मेथनॉल की दो बूंदें या पूर्ण इथेनॉल.

2.- लाइटर से दूर हवा में सूखने दें.

3.- यदि स्मीयर ठोस माध्यम में एक कल्चर से आता है, तो शुष्क स्मीयर गर्मी के साथ तय होता है, इसे लाइटर की लौ के सबसे गर्म क्षेत्र से 2 से 3 बार जल्दी से गुजरता है।.

4.- बाएं हाथ के पृष्ठीय भाग के साथ स्मीयर के निचले हिस्से को स्पर्श करें (दाएं हाथ के लिए, अन्यथा दाहिने हाथ का उपयोग करें) और जांचें कि यह ठंडा है.

सी। सरल धुंधला

1.- स्मीयर में चयनित डाई की 2 बूंदें डालें और प्रत्येक डाई के विशिष्ट प्रोटोकॉल में आवश्यक समय के लिए कार्य करें (आमतौर पर 1 और 5 मिनट के बीच).

2.- कुछ रंजक को उनकी सक्रियता के लिए ऊष्मा के उपयोग की आवश्यकता होती है, ऐसे में लाईटर की लौ में स्लाइड को गर्म करते समय बहुत सावधानी बरतने की जरूरत होती है (चिमटी के साथ इसे जोड़कर और उबलने से बचें)। स्मीयर की अधिकता उन कोशिकाओं को नष्ट कर सकती है जिन्हें आप निरीक्षण करना चाहते हैं.

3.- एक पिपेट से आसुत पानी से धो कर अतिरिक्त डाई निकालें। धीरे से काम की मेज पर झुका हुआ, इसके किनारे पर स्लाइड को टैप करके धोने का पानी निकालें.

4.- हवा को सूखने दें.

5.- अवलोकन के प्रकार के आधार पर, इस चरण में एक आवरण का उपयोग किया जाता है या नहीं। कवरलिप स्मीयर की सुरक्षा और संरक्षण करता है। यदि इस स्तर पर तेल में विसर्जन द्वारा अवलोकन किया जाता है, तो कोई भी कवरलिप का उपयोग नहीं किया जाता है, लेकिन स्मीयर को संरक्षित नहीं किया जा सकता है.

डी। स्मीयर का निश्चित संरक्षण

1.- नीचे दिए गए प्रत्येक समाधान में, न्यूनतम 5 मिनट के लिए स्मीयर को क्रमिक रूप से विसर्जित करें। इन "स्नान" का उद्देश्य धब्बा को पूरी तरह से निर्जलित छोड़ना है। प्रत्येक अभिकर्मक को सूखा जाना चाहिए, अगले स्नान में स्मीयर को पेश करने से पहले.

निर्जलित स्नान का क्रम निम्नानुसार है:

1. इथेनॉल 70%
2. 95% इथेनॉल
3. शुद्ध एसीटोन
4. एसीटोन-जाइलोल 1: 1 मिलाएं
5. xylene

फिर हवा को सूखने दें.

2.- कैनेडियन बलम या असेंबली के अन्य साधनों का उपयोग करते हुए, अधिमानतः 22 × 22 मिमी, कवरलिप माउंट करें.

संदर्भ

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